分子遺伝学的手法を用いた歯周病細菌の迅速な血清型決定法の開発

利用分子遗传学方法开发牙周病细菌快速血清分型方法

• 批准号: 11771157
• 负责人: 中野 善夫
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771157/
• 关键词: A.actinomycetemcomitans; 多糖抗原; 血清型; PCR; 歯周病

Actinobacillus actinomycetemcomitansの血清型特異多糖遺伝子群を指標として血清型を迅速かつ簡便に決定するために、各血清型を規定している遺伝子を単離しDNAの塩基配列を決定しなければならない。本研究ではまず、まだ血清型特異多糖抗原合成遺伝子が同定されていない血清型a、d、eの株より、目的の遺伝子群をクローン化し、その構造を明らかにした。血清型dおよびeの血清型特異多糖抗原合成遺伝子群は、bあるいはcの同遺伝子群との類似性から比較的容易に単離し、構造を明らかとすることができた。それらの結果はBiochim.Biophys.Acta(1999)1489:457-461および(2000)1493:259-263に発表した。血清型aの血清型特異多糖は、他の血清型の特異多糖とは合成経路が全く異なっており、類似性を手掛かりに遺伝子を同定することができなかった。そこで、トランスポゾンを用いて血清型特異多糖欠損株を作製することで、同遺伝子群を同定し塩基配列を決定した(Biochim.Biophys.Acta(2000)1517:135-138)。それらの遺伝子群の中から、血清型cにのみ存在する6-deoxy-L-taloseを合成する遺伝子を同定し、この遺伝子が他の血清型には存在しないことを明らかにした(J.Biol.Chem.(2000)275)。以上の結果より、それぞれの血清型に特異的な塩基配列を選び出すことが可能になり、実際に血清型特異プライマーを設計した。合成したオリゴヌクレオチドを用いてPCRを行ない、人の口腔内から採取した試料の中に存在するA.actinomycetemcomitansの血清型を決定する条件を見出すことができた。その成果は、J.Clin.Microbiol.に投稿した。

The serotype specific polysaccharide gene subset of Actinobacillus actinomycetemcomitans is an indicator for rapid and simple determination of serotype, and the gene sequence of each serotype is determined independently of DNA gene sequence. In this study, we identified the same genes for the synthesis of serotype specific polysaccharide antigens, including those of serotype a, d and e. Serotype d and e are serotype-specific polysaccharide antigen synthesis loci, b and c are easy to compare in similarity and structure. Biochim.Biophys.Acta(1999)1489:457-461 (2000)1493:259-263 Serotype a specific polysaccharide and other serotypes specific polysaccharide are synthesized in the same way, similar to each other. Biophys.Acta(2000)1517:135-138). The presence of 6-deoxy-L-talose in serotype c of the same gene group and the presence of 6-deoxy-L-talose in serotype c of the same gene group (J. Biol.Chem. (2000)275)。The results are as follows: serotype specific gene alignment is possible, serotype specific gene alignment is possible, and serotype specific gene alignment is possible. The conditions for determining the serotypes of A.actinomycetemcomitans in samples taken from human oral cavity were determined by PCR. J. Clin. Microbiol.

项目成果

Yoshio Nakano 他: "Thymidine diphosphate-6-deoxy-L-lyxo-4-hexalose Reductase Synthesizing dTDP-6-deoxy-L-talose from Actinobacillus actinomy cetemcomitans"Journal of Biological Chemistry. (印刷中).

Yoshio Nakano 等人：“胸苷二磷酸-6-脱氧-L-lyxo-4-己糖还原酶从伴放线杆菌中合成 dTDP-6-脱氧-L-塔罗糖”《生物化学杂志》（正在出版）。

Yoshio Nakano 他: "Thymidine diphosphate-6-deoxy-L-lyxo-4-hexulose reductase synthesizing dTDP-6-deoxy-L-talose from Actinobacillus actinomycetemcomitans"Journal of Biological Chemistry. 275・10. 6806-6812 (2000)

Yoshio Nakano 等人：“胸苷二磷酸-6-脱氧-L-lyxo-4-己酮糖还原酶从伴放线杆菌中合成 dTDP-6-脱氧-L-塔罗糖”《生物化学杂志》275・10。 ）

Yoshio Nakano 他: "A gene cluster for the synthesis of serotype d-specific polysaccharide antigen in Actinobacillus actinomycetemcomitans"Biochimica et Biophysica Acta. 1493. 259-263 (2000)

Yoshio Nakano 等：“伴放线放线杆菌中合成血清型 d 特异性多糖抗原的基因簇”Biochimica et Biophysicala Acta. 1493. 259-263 (2000)

Nao Suzuki 他: "Genetic analysis of the gene cluster for the synthesis of serotype a-specific polysaccharide atigen in Actinobacillus actinomycetemcomitans"Biochimica et Biophysica Acta. 1517. 135-138 (2000)

Nao Suzuki 等人：“Actinobacillus actinomycetemcomitans 中用于合成血清型 a 特异性多糖抗原的基因簇的遗传分析”Biochimica et Biophysicala Acta 1517. 135-138 (2000)。

Yasuo Yoshida 他: "Genetic analysis of the gene cluster responsible for synthesis of serotype e-specific polysaccharide antigen of Actinobacillus actinomy cetemcomitans"Biochemica et Biophysica Acta. 1489. 457-461 (1999)

Yasuo Yoshida 等人：“负责合成放线菌cetemcomitans血清型e特异性多糖抗原的基因簇的遗传分析”Biochemica et Biophysicala Acta.1489.457-461(1999)。