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メタロチオネインによる転写因子のレドックス制御

金属硫蛋白对转录因子的氧化还原调节

基本信息

批准号：
11771481
负责人：
原俊太郎
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11771481/
关键词：
メタロテオネインレドックス制御転写因子 NF-κB メタロチオネイン

项目摘要

平成11年度の本研究においては、低分子量の金属結合蛋白質であるメタロチオネイン(MT)が、細胞質内のレドックス状態を変化させることにより、IκBの分解抑制を介して転写因子NF-κBの活性を負に調節していることを見い出した。しかし、MTは細胞の種類や状態によっては核に局在することが知られており、核においてもNF-κBの活性調節に関与している可能性も考えられる。そこで今年度は、MTの細胞内局在の違いが転写因子NF-κBの活性化にどのような影響を与えるか検討するために、MTに高分子量蛋白質であるβ-ガラクトシダーゼ(β-gal)や核移行シグナル(NLS)などを融合し、MTを細胞質にのみ、あるいは核にのみ発現させる系の構築を行った。まず、MTをβ-gal遺伝子と融合させ、MT欠損細胞に発現させたところ、MTに対する特異的抗体による抗体染色の結果、MTが細胞質にのみ局在していることが明らかとなった。また、MT-β-gal融合蛋白質に更にNLSを融合してから発現させると、この場合はMTは核にのみ局在していた。しかし、この系では細胞が生きたままMTの局在を検討することができないので、次に、MTとgreen fluorescent protein(GFP)の融合蛋白質に、更に β-galやNLSを融合し、細胞に発現させることを試みた。その結果、GFP-MT-β-gal融合蛋白質を発現させるとGFPによる蛍光は細胞質にのみ、また、GFP-NLS-MT融合蛋白質を発現させると蛍光は核にのみ観察された。以上の結果から、MTを細胞質にのみ、あるいは核にのみ発現させることが可能となった。現在、これらの融合蛋白質をMT欠損細胞に発現させることにより、NF-κBの活性化がどのように変化するかについて、ゲルシフトアッセイやルシフェラーゼレポータージーンアッセイにより検討を進めている。

In this study, we found that low molecular weight metal-binding protein (MT) is a key factor in the inhibition of IκB decomposition and the negative regulation of NF-κB activity. The type and state of MT cells are related to the regulation of NF-κB activity in the nuclear system. This year, MT's intracellular regulation affects the activation of NF-κB, and MT's high molecular weight protein, β-gal, and nuclear migration (NLS), and MT's cytoplasmic and nuclear development systems are being constructed. MT β-gal gene fusion, MT defective cell detection, MT specific antibody staining results, MT cytoplasmic detection The MT-β-gal fusion protein was developed in the presence of the NLS fusion protein, and the MT fusion protein was developed in the presence of the NLS fusion protein. The fusion protein of MT and green fluorescent protein(GFP) and β-gal and NLS in cell development was studied. As a result, the GFP-MT-β-gal fusion protein was developed in the cytoplasm of GFP, and the GFP-NLS-MT fusion protein was developed in the nucleus of GFP. The above results show that there is no difference between the two. Now, the fusion protein MT deficient cell development, NF-κB activation and transformation, and the development of fusion protein MT deficient cell development, NF-κB activation and transformation.