インテグリン裏打ちタンパク質パキシリンの細胞内輸送過程

整合素衬里蛋白桩蛋白的细胞内转运过程

• 批准号: 11780522
• 负责人: 真崎 雄一
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka Bioscience Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780522/
• 关键词: パキシリン; ARFGAP; ゴルジ体; アクチン; 細胞運動; ARF GAP

細胞の運動性や運動の方向性の制御は、細胞骨格構築の制御とインテグリン裏打ちタンパク質群の集積の制御との両者によって行われていると捉えることができる。本研究ではインテグリン裏打ちタンパク質群の一つであるパキシリンならびにその結合タンパク質に注目し、細胞の運動性及び細胞運動の方向性決定の基本機構を解明することを目指している。この目的を果たすため、本研究期間において、ARF1GAPの機能ドメインをもつパキシリン結合タンパク質(PAG1と命名)の局在部位の決定および機能解析を行った。1.PAG1の局在部位の決定申請者らは、PAG1がすでに蛍光抗体法を用いてゴルジ体にオーバーラップするように核周辺部に局在することを見出していたが、さらに電子顕微鏡を用いた抗体法においても同様の結果を得た。また、生化学的にも検討するために細胞を可溶化画分と膜画分に分けその局在を検討した結果、このタンパク質は、パキシリンとほぼ同様の割合(約20%)で膜画分に存在することがわかった。2.PAG1の機能解析PAG1の細胞内での役割を検討するために、繊維芽細胞にこのタンパク質あるいは、ARFに対してGAP活性を著しく低下させた変異体を強発現させ、細胞に与える影響を調べた。PAG1を強発現させた細胞では、バキシリンの細胞周縁部を除く細胞基質間接着点への集積の減少とアクチンストレスファイバーの減少がみられた。一方、GAP活性を著しく低下させた変異体では、そのような効果はみられなかった。さらに、この結果をテトラサイクリンによる発現調節系(Tet off system)を用いて検討した結果同様の結果が得られた。また、この系を用いて、細胞の接着性および運動性の変化を検討した結果、PAG1は、細胞の接着性にはほとんど影響を与えないものの、細胞の運動性に対して若干の促進活性を示した。以上の結果をまとめ、Mol.Biol.Cell誌に発表した。

Cell の motility や movement の directional の suppression は, cell bone building の suppression と イ ン テ グ リ playing ち ン タ ン パ ク の set product quality group の suppression と の struck the に よ っ て line わ れ て い る と catch え る こ と が で き る. This study で は イ ン テ グ リ playing ち ン タ ン パ ク の a mass group つ で あ る パ キ シ リ ン な ら び に そ の combining タ ン パ の ク に attention し, cell motility and び cell movement の directional decision の basic institutions を interpret す る こ と を refers し て い る. こ の purpose を fruit た す た め, this study during に お い て, ARF1GAP の function ド メ イ ン を も つ パ キ シ リ ン combining タ ン パ ク mass (PAG1 と) の bureau decided in part の お よ び line function analytical を っ た. 1. PAG1 の bureau decided to applicants in parts の ら は, PAG1 が す で に 蛍 を light antibody method with い て ゴ ル ジ body に オ ー バ ー ラ ッ プ す る よ う に nucleus weeks 辺 に bureau in す る こ と を shows し て い た が, さ ら に electronic 顕 micromirror を with い た antibody technique に お い て も with others in the result of の を た. Beg す ま た, biochemistry に も 検 る た め に cells を solubilization paint points と membrane points に け そ の bureau in を beg し 検 た results, こ の タ ン パ ク は, パ キ シ リ ン と ほ ぼ with others の cut (about 20%) で membrane painting existence に す る こ と が わ か っ た. 2. PAG1 の function analytical PAG1 の intracellular で の service cut を beg す 検 る た め に, 繊 d bud cells に こ の タ ン パ ク qualitative あ る い は, ARF に し seaborne て GAP activity を the し く low さ せ た - variant を strong 発 now さ せ, cell に and え る influence を adjustable べ た. Strong PAG1 を 発 now さ せ た cells で は, バ キ シ リ ン week try の cells を in addition to the points く cell matrix indirect へ の set product の reduce と ア ク チ ン ス ト レ ス フ ァ イ バ ー の reduce が み ら れ た. One party, the GAP activity を holds the く low させた variant で で, そ <s:1> ような effect った みられな った った った. さ ら に, こ の results を テ ト ラ サ イ ク リ ン に よ る 発 now regulating system (Tet off system) を い て beg し 検 た results with others in the result of の が ら れ た. ま た, こ の is を with い て, cell の then お よ び motility の variations change を beg し 検 た results, PAG1 は, cell の then に は ほ と ん ど influence を and え な い も の の の, cell motility に し seaborne て several の promote active を shown し た. The above <s:1> results をまとめ and the publication of Mol.Biol.Cell に show that た た.

项目成果

Mazaki,Y.: "An ARFGAP protein Git2-short/KIAA0148 is involved in subcellular localization of paxillin, and actin cytoskeletal organization."Mol.Biol.Cell. (In press).

Mazaki,Y.：“ARFGAP 蛋白 Git2-short/KIAA0148 参与桩蛋白和肌动蛋白细胞骨架组织的亚细胞定位。”Mol.Biol.Cell。

Kondo,A.: "A new paxillin-binding protein, PAG3/Papα/KIAA0400, bearing an ARF GTPase-activating protein activity is involved in paxillin recruitment to focal adhesions and migration."Mol.Biol.Cell. 11. 1315-1327 (2000)

Kondo, A.：“一种新的桩蛋白结合蛋白 PAG3/Papα/KIAA0400，具有 ARF GTP 酶激活蛋白活性，参与桩蛋白向粘着斑的募集和迁移。”Mol.Biol.Cell. 11. 1315-1327 (2000)

Ito A.: "A truncated isoform of PP2A promotes cell motility through paxillion phosphorylation"EMBO J.. 19. 562-571 (2000)

Ito A.：“PP2A 的截短亚型通过 paxillion 磷酸化促进细胞运动”EMBO J.. 19. 562-571 (2000)

Hashimoto,S.: "Interaction of paxillin with p21-activated kinase (PAK) Association of paxillin alpha with the kinase-inactive and the Cdc42-activated forms of PAK3."J.Biol.Chem.. 276. 6037-6045 (2001)

Hashimoto,S.：“桩蛋白与 p21 激活激酶 (PAK) 的相互作用，桩蛋白 α 与 PAK3 的激酶失活和 Cdc42 激活形式的关联。”J.Biol.Chem.. 276. 6037-6045 (2001

Kondo A.: "A new paxillin-binding protein, PAG3/Papα/KIAA0400, bearing an ARF GTPase-activating protein activity is involved in paxillin recruitment to focal adhesions and migration"Mol.Biol.Cell. (in press).

Kondo A.：“一种新的桩蛋白结合蛋白 PAG3/Papα/KIAA0400，具有 ARF GTP 酶激活蛋白活性，参与桩蛋白向粘着斑的募集和迁移”Mol.Biol.Cell。