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細胞内小胞輸送の経路特異性を規定する新規ArfGAP、SMAP遺伝子群の解析

分析定义细胞内囊泡运输途径特异性的新 ArfGAP 和 SMAP 基因

基本信息

批准号：
18050003
负责人：
佐竹正延
金额：
$ 3.71万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18050003/
关键词：
小胞輸送 ArfGTPase ArfGAP クラスリンエンドサイトーシス Eカドへリン

项目摘要

Eカドヘリンは、上皮細胞の接着結合において、中心的な役割を果たしている接着因子である。上皮細胞の細胞間結合が乖離し、間葉系の細胞のような特徴をもった細胞に性質転換するEMTにおいて、エンドサイトーシスによる細胞内への取り込みが亢進されることによって、細胞表面におけるEカドヘリン量を低下させる。SMAP1はARF6に特異的なGAPであり、その一次構造にクラスリン重鎖と結合できる結合モチーフを有し、ARF6が制御するクラスリン依存的に細胞内をリサイクルしている因子のエンドサイトーシスに関わっている。本研究ではSMAP1がEカドヘリンのエンドサイトーシスに関与しているかどうか、他のARF6GAPであるGIT1とAMAP2/PAG3も含めて検討した。MDCK細胞をTPA存在下でEカドヘリンのエンドサイトーシスを充進させたところ、SMAP1の野生型もしくはGAP活性が欠失したR61Q変異体を過剰発現している細胞ではEカドヘリンの取り込みが顕著に阻害されていた。一方、AMAP2、GIT1双方に関しては、有意な阻害効果が認められなかった。これより、ARF6GAPのうちSMAP1が、MDCK細胞におけるEカドヘリンのエンドサイトーシスを制御していることが示唆された。また、長時間TPAで培養させEMTを誘導させたところ、SMAP1を過剰発現させた細胞において、Eカドヘリンの取り込みが阻害されたため、細胞同士が乖離しにくくなっていた。そこで、Boyden chamber法により細胞運動能を評価したところ、SMAP1の野生型もしくはR61Q変異体を過剰発現している細胞の運動能が著しく低下していた。Eカドヘリンは、その輸送経路にクラスリンもしくはカベオラ小胞を用いる。そこで、SMAP1がカベオラ小胞のエンドサイトーシスに関係しているかどうか、カベオラ依存的に細胞内へと取り込まれるBSAを用いて検討したところ、SMAP1はBSAの取り込みには何ら影響を与えなかったため、カベオラの系にはSMAP1が関与していないことが示された。このことから、MDCK細胞におけるEカドヘリンのエンドサイトーシスは、SMAP1に制御されるクラスリン依存的な経路で細胞内へと取り込まれていることが示唆された。

E., epithelial cell adhesion, central adhesion The cell-to-cell association of epithelial cells is different, and the cell characteristics of mesenchymal cells are different. The cell quality is higher. The cell surface is lower. SMAP1 is specific to ARF6, and its primary structure is linked to ARF6. In this study, SMAP1 and AMAP2/PAG3 were included in the study. MDCK cells in the presence of TPA, E, C, E, C, E, E, One party, AMAP2 and GIT1 are related to each other and intentionally blocked. ARF6GAP and MDCK cells are controlled. E-mail:[email protected] In addition, Boyden chamber method can be used to evaluate the motor activity of SMAP1 wild-type R61Q mutant cells. E-mail:[email protected][email protected] SMAP1 is the first to examine the relationship between BSA and SMAP1, and the relationship between BSA and SMAP1 is the second to examine the relationship between BSA and SMAP1. This is the first time that MDCK cells have been used to control the intracellular pathway of cell growth.