神経細胞におけるG蛋白共役型受容体からPYK2を介したシグナル伝達経路の解析

神经元G蛋白偶联受体至PYK2信号转导通路分析

• 批准号: 11780561
• 负责人: 山下 拓史
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780561/
• 关键词: PYK2; protein tyrosine kinase; G蛋白共役型受容体; MAP kinase; yeast two-hybrid system; PAP-1; SH3ドメイン; Golgi装置; Protein tyrosine kinase

G蛋白共役型受容体からmitogen-activated protein kinase (MAPK)経路へ至るシグナル伝達において、中心的な役割を担うPYK2と結合するアダプター蛋白としてわれわれが新規に見いだしたPYK2-associated protein-1(PAP-1)の解析を平成11年度に引き続き行った。11年度までに遺伝子の塩基配列の決定と、in vitroおよびin vivoにおけるPYK2とPAP-1の結合の確認、ならびに抗体の作成を行っているが、平成12年度はさらに次の結果を得た。(1)GFP結合PAP-1蛋白をCOS7細胞に発現させ共焦点レーザー顕微鏡で観察したところ細胞質全体に分布し、一部はGolgi装置のマーカーと一致した。PYK2も同様の分布を示し、細胞内でもPYK2とPAP-1の一部が結合していることが確認された。(2)in vitroにおけるkinasion assayではprotein tyrosine kinaseのFyn,PYK2がPAP-1をチロシンリン酸化した。(3)PAP-1の各ドメインをドミナントネガティブとして細胞内に発現させ、PYK2の局在に与える影響を調べたが、その分布に変化は見られなかった。(4)ノーザンプロット解析では、各組織に広く発現が認められ、脳内においても各部位での発現が確認された。(5)一方マウスの発生過程の脳においてPAP-1抗体を用いて免疫組織染色を行ったところプルキンエ細胞のみが特異的に染色され、プルキンエ細胞の細胞質とデンドライトにPAP-1の強い発現がみられた。これらの研究結果を現在まとめて論文投稿準備中である。さらに本研究のPYK2や他のprotein tyrosine kinaseの基質の検索を行っていたところ、偶然にprotein tyrosine kinaseのFynが家族性パーキンソン病原因遺伝子産物のα-synucleinのチロシン残基をリン酸化することを見いだし、報告した。

G protein co-active receptor mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathway to the center of the protein, PYK2, binding to the protein, protein, In 2011, the determination of gene base alignment, in vitro and in vivo confirmation of PYK2 and PAP-1 binding, and in the preparation of antibodies were carried out. In 2012, the second results were obtained. (1)GFP binding PAP-1 protein was detected in COS-7 cells. Microscopy showed that the distribution of GFP in the cytoplasm of COS-7 cells was consistent with that of GFP. PYK-2 isoforms were identified in the distribution of PYK-2 and PAP-1 in cells. (2)in vitro kinases assay is a reaction to protein tyrosine kinase Fyn,PYK2 and PAP-1. (3) The distribution of PAP-1 and PYK2 in the cytoplasm was changed. (4)In the analysis of the structure, the occurrence of various tissues is recognized, and the occurrence of various parts of the tissue is recognized. (5)The expression of PAP-1 in the cytoplasm of cells was detected by immunohistochemical staining. The results of this study are now being prepared for submission. In this paper, we report the progress of matrix transformation of PYK2 and other protein tyrosine kinases, and occasionally the transformation of α-synuclein residues from protein tyrosine kinases and Fyn family disease-causing genes.

项目成果

Nakamura T,Yamashita H,Takahashi T,Nakamura S: "Activated Fyn phosphorylates α-synuclein at tyrosine residue 125"Biochem Biophys Res Commun. 280. 1085-1092 (2001)

Nakamura T、Yamashita H、Takahashi T、Nakamura S：“活化的 Fyn 在酪氨酸残基 125 处磷酸化 α-突触核蛋白”Biochem Biophys Res Commun. 280。1085-1092 (2001)