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α-synucleinキナーゼの同定とα-synuclein凝集機序の解析

α-突触核蛋白激酶的鉴定及α-突触核蛋白聚集机制分析

基本信息

批准号：
13210104
负责人：
山下拓史
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13210104/
关键词：
α-synuclein protein tyrosine kinase Parkinson病 phosphorylation Pyk2 Fyn ニトロ化 tyrosine 125

项目摘要

α-synucleinはパーキンソン病の発症に関与する重要な蛋白として注目を集めている。近年、α-synucleinが細胞内でリン酸化、ニトロ化、ユビキチン化、糖化など様々な修飾を受けることが明らかにされている。細胞ストレスに応じてリン酸化、脱リン酸化、ニトロ化、さらにニトロ化による重合を起こすチロシン残基は、α-synucleinのコンフォメーション変化に重要な役割を持つと考えられている。われわれは細胞内においてα-synucleinをチロシンリン酸化するチロシンキナーゼの検索を行い、さらに各チロシン残基がα-synucleinの重合に与える影響について検討した。wild typeおよび常染色体優性遺伝性パーキンソン病で報告されたA30PおよびA53T変異型や、チロシン残基(Y)をフェニルアラニン残基(F)に置換したY39F、Y125F、Y133F、Y136F変異型のα-synuclein cDNAを作成した。COS7細胞にα-synucleinとともにチロシンキナーゼを共発現させ、α-synucleinのリン酸化状態を解析した。c-SrcなどのSrcファミリーキナーゼはα-synucleinのY125を特異的にリン酸化し、wild type、A30P、A53T変異型の間で程度に差は認めなかった。Osmotic stressによるチロシンキナーゼPyk2/RAFTKの活性化により、α-synucleinは細胞内においてチロシンリン酸化され、ドミナントネガティブ型Pyk2を発現させることによりリン酸化は消失した。Pyk2は細胞内においてα-synucleinのリン酸化に関わっている可能性が示唆された。さらに、これらのチロシン残基のニトロ化による影響を検討した。Y to F変異を持つ様々な変異型α-synuclein蛋白を使って、peroxynitriteによりチロシン残基をニトロ化した時のα-synucleinのdimer形成への影響を検討した。wild type、A30P、A53T変異型α-synuclein蛋白はニトロ化され、いずれもdimerを形成し、その程度は蛋白間で差はみられなかったが、Y125F変異のある蛋白ではいずれもdimer形成がみられなかった。α-synucleinのニトロ化は重合促進の原因となり、dimer形成の効率は関与するチロシン残基により異なることが明らかとなった。チロシン125のリン酸化やニトロ化は、α-synucleinのコンフォメーション変化を考える上で重要であると考えられた。

α-synuclein is an important protein in the development of diseases. In recent years, α-synuclein has become an intracellular enzyme, such as acidification, methylation, glycosylation, and modification. Cell cycle acidification, deacidification, In addition, the detection of α-synuclein residues in the cytoplasm is also discussed. The alpha synuclein cDNA of wild type and autosomal dominant gene was prepared by substitution of A30P and A53T heteromorphic residues (Y) and Y39F, Y125F, Y133F and Y136F heteromorphic residues (F). COS7 cells were found to be α-synuclein and α-synuclein. c-Src Osmotic stress causes the activation of Pyk2/RAFTK, α-synuclein, and the development and disappearance of intracellular Pyk2. Pyk2 is an intracellular inhibitor of α-synuclein and its possible acidification. In addition, the effects of phosphorylation of these cAMP residues were investigated. To investigate the effects of Y to F variation on α-synuclein dimer formation in the presence of peroxidite residues. Wild type, A30P, A53T variant α-synuclein protein is transformed into protein, which forms dimer, and the degree of protein differentiation is changed into protein. The reason why α-synuclein is converted into dimer is related to the difference between α-synuclein and dimer. The first step is to change the structure of α-synuclein and α-synuclein.