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α-synucleinキナーゼの同定とα-syuclein凝集機序の解析

α-突触核蛋白激酶的鉴定及α-突触核蛋白聚集机制分析

基本信息

批准号：
12210114
负责人：
山下拓史
金额：
--
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12210114/
关键词：
Parkinson病 α-synuclein protein tyrosine kinase Fyn チロシンリン酸化 SH-SY5Y細胞凝集体形成

项目摘要

α-synucleinはパーキンソン病の発症に関与する重要な蛋白として注目を集めている。しかし、α-synucleinが神経細胞内でどのように修飾を受け、どのような機序で凝集体を形成するのか、そのプロセスは未だ不明である。われわれはα-synucleinをリン酸化する酵素の検索を行い、α-synucleinのリン酸化がα-synucleinの凝集に及ぼす影響を検討した。中枢神経でシグナル伝達に重要な役割を担うチロシンキナーゼであるFyn、Lyn、PYK2、FAK、およびセリン・スレオニンキナーゼであるMAPK/ERK1、SAPK/JNK、Cdk5をそれぞれCOS7細胞に発現させ、[γ-32P]ATPを用いて免疫沈降キナーゼアッセイを行った。基質にはGST融合α-synuclein蛋白を用いた。今回検討した7種類のキナーゼのうち、Fynがα-synucleinのチロシン残基をリン酸化した。家族性パーキンソン病で報告されているA30PおよびA53T変異型α-synucleinもFynにより同様にリン酸化された。α-synucleinは4つのチロシン残基(Y39、Y125、Y133、Y136)を持つが、Fynによるα-synucleinのリン酸化部位はY125であることが判明した。脳内におけるα-synucleinの発現は黒質、線条体、海馬などに多く、Fynの発現部位と一致し、また免疫蛍光染色と共焦点レーザー顕微鏡による観察でもα-synucleinとFynは細胞内で共存し、細胞内でα-synucleinがFynによりリン酸化されることが推察される。さらにチロシンがリン酸化を受けていない高純度のα-synuclein蛋白をstreptolysin-OによりSH-SY5Y細胞に導入し培養したところ、生きた細胞内にα-synucleinからなる凝集体が容易に形成された。リン酸化、脱リン酸化や、ニトロ化などによるα-synucleinのチロシン残基の修飾は、α-synucleinの凝集機序や、神経変性過程を解析する上で重要であると考えられる。平成13年度は、平成12年度の成果をふまえ、さらに研究を進める予定である。

α-synuclein is an important protein in the development of diseases.α-synuclein is not clear about the mechanism for the formation of aggregates in neurons. To investigate the effects of α-synuclein on enzyme activation, α-synuclein activation, and α-synuclein aggregation The central nervous system contains MAPK/ERK1, SAPK/JNK, Cdk5 and [γ-32P]ATP. GST-fused α-synuclein protein This paper discusses the 7 kinds of protein residues in Fyn and α-synuclein. Familial disease is reported in A30P and A53T variant α-synuclein and Fyn.α-synuclein 4 residues (Y39, Y125, Y133, Y136) were identified. The expression of α-synuclein in the cytoplasm, striae, hippocampus and Fyn was detected by immunohistochemical staining and confocal microscopy. The α-synuclein protein of high purity was introduced into SH-SY5Y cells, and the α-synuclein aggregates were easily formed. The modification of α-synuclein residues, the mechanism of α-synuclein aggregation, and the analysis of neurochemical processes are important. The results of Heisei Y13 and Heisei Y12 are scheduled to be published.