脂質性情報伝達物質の生体内産生に関わる新規リパーゼの構造と機能

参与脂质信号物质体内产生的新型脂肪酶的结构和功能

• 批准号: 12760089
• 负责人: 森山 達哉
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760089/
• 关键词: ジアシルグリセロール; リパーゼ; クローニング; 2-AG; リピドメディエーター; 膜タンパク質; 組織分布; アイソザイム; ジアシルグリセロールリパーゼ; メンブレンプロテイン; カンナビノイド; 2-アラキドノイルグリセロール; イノシトールリン脂質

2-アラキドノイルグリセロール(2-AG)は最近発見された機能性脂質分子であり、カンナビノイドレセプターに対する内因性のリガンドである。2-AGは記憶や免疫作用に関わる可能性が示唆されているが、その生理的意義は未だ明確ではない。ジアシルグリセロール(DG)リパーゼは生体内における2-AG産生酵素の有力な候補である。そこで、カビのDGリパーゼとホモロジーを有するヒト胎児脳由来のESTクローンを基に、5'-RACE法によってヒト脳由来cDNAライブラリーより完全長cDNAを得た。推定されるアミノ酸配列を解析したところ、本クローンはリパーゼの活性中心コンセンサス配列を有する672アミノ酸からなるタンパク質をコードし、N末端側に4つの膜貫通ドメインを有している膜結合型タンパク質であるとが示唆された。この遺伝子は脳や肝臓、胎盤、免疫細胞などの多くの組織で発現していた。本遺伝子をCOS1細胞に発現させたところ、本タンパク質は膜画分に発現した。そのホモジネートを用いてDGリパーゼ活性を測定したところ、コントロールに比べて約2〜4倍の活性上昇が認められ、この活性はDGリパーゼの特異的な阻害剤によって完全に阻害された。以上より、ヒト膜結合型DGリパーゼのクローニングに成功したと考えられる。さらに、本分子のアイソザイムをデータベースにて検索したところ、ホモログと考えられるクローン(KIAA0659)を見いだした。このクローンは完全長でなかったので、キャップサイトハンティング法によって5'-上流部を得た。こうしてこのホモログに関しても完全長の塩基配列を取得した。このクローンもリパーゼの活性中心コンセンサス配列を有し、N末端側に4つの膜貫通ドメインを有している膜結合型タンパク質であることが示唆された。分子サイズは115kDaであった。発現組織を解析したところ、脳に特に多いことが特徴的であった。

2 - ア ラ キ ド ノ イ ル グ リ セ ロ ー ル (2 - AG) 発 は last see さ れ た functional lipid molecules で あ り, カ ン ナ ビ ノ イ ド レ セ プ タ ー に す seaborne る endogenous の リ ガ ン ド で あ る. 2 - AG は や immune memory に masato わ が る possibility in stopping さ れ て い る が, そ の physiological significance は だ not clear で は な い. Youdaoplaceholder0, ジアシ, グリセロ, グリセロ, な (DG)リパ, ゼ, ゼ, in the body, the における2-AG enzyme is a powerful な candidate である. そ こ で, カ ビ の DG リ パ ー ゼ と ホ モ ロ ジ ー を have す る ヒ ト tire where 脳 origin の EST ク ロ ー ン を に, 5 '- RACE method に よ っ て ヒ ト 脳 origin cDNA ラ イ ブ ラ リ ー よ り completely long cDNA を た. Presumption さ れ る ア ミ ノ acid with column を parsing し た と こ ろ, this ク ロ ー ン は リ パ ー ゼ の active center コ ン セ ン サ ス match column を have す る 672 ア ミ ノ acid か ら な る タ ン パ ク qualitative を コ ー ド し, N terminal side に 4 つ の transmembrane ド メ イ ン を have し て い る type membrane bound タ ン パ ク qualitative で あ る と が in stopping さ れ た. The <s:1> cultural heritage 伝 offspring 脳や 脳や liver, placenta, immune cells な <s:1> <s:1> multiple く <e:1> tissues で present て て た た た. This heritage 伝 son を COS1 cells に 発 now さ せ た と こ ろ, this タ ン パ ク qualitative は membrane draw points に 発 now し た. そ の ホ モ ジ ネ ー ト を with い て DG リ パ ー ゼ activity determination of を し た と こ ろ, コ ン ト ロ ー ル に than べ て about 2 ~ 4 times の activity rise が recognize め ら れ, こ の active は DG リ パ ー ゼ の specific な resistance against tonic に よ っ て completely に resistance against さ れ た. Above よ り, ヒ ト membrane bound type DG リ パ ー ゼ の ク ロ ー ニ ン グ に successful し た と exam え ら れ る. さ ら に, this molecular の ア イ ソ ザ イ ム を デ ー タ ベ ー ス に て 検 cable し た と こ ろ, ホ モ ロ グ と exam え ら れ る ク ロ ー ン (KIAA0659) を see い だ し た. Long こ の ク ロ ー ン は completely で な か っ た の で, キ ャ ッ プ サ イ ト ハ ン テ ィ ン グ method に よ っ て 5 'た を - the upper department. <s:1> う て て ホモログに ホモログに ホモログに complete long <s:1> base arrangement を to obtain た た. こ の ク ロ ー ン も リ パ ー ゼ の active center コ ン セ ン サ ス match column を し, N terminal side に 4 つ の transmembrane ド メ イ ン を have し て い る type membrane bound タ ン パ ク qualitative で あ る こ と が in stopping さ れ た. Molecule サ サ ズ サ 115kDaであった. The development organization を analyzes the であった of the characteristics of たと ろ ろ ろ and 脳に に many <s:1> とが とが とが.

项目成果

Tatsuya Moriyama: "3-Hydroxy-3-methylglutaryl Coenzyme A Reductase Is Sterol-Dependently Cleaved by Cathepsin L-Type Cysteine Protease in the Isolated Endoplasmic Reticulum"Archives of Biochemistry and Biophysics. 386(2). 205-212 (2001)

Tatsuya Moriyama：“3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶 A 还原酶在分离内质网中被组织蛋白酶 L 型半胱氨酸蛋白酶甾醇依赖性裂解”生物化学和生物物理学档案。

Tatsuya Moriyama: "Molecular cloning and expression of human membrane-bound diacylglycerol lipase"Abstract of seventh international congress on platelet-activating factor and lipid mediators. 114-114 (2001)

Tatsuya Moriyama：“人膜结合二酰基甘油脂肪酶的分子克隆和表达”第七届国际血小板活化因子和脂质介质大会摘要。