食中毒菌に高い抗菌効果を示すバクテリオシンの作出

创造对食物中毒细菌具有高抗菌作用的细菌素

• 批准号: 12760083
• 负责人: 川井 泰
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12760083/
• 关键词: 抗菌性ペプチド; バクテリオシン; 乳酸菌

ヒト乳児(2ヶ月齢)糞便より分離したLactobacillus reuteri LA6株により生産される、食中毒菌(Bacillus cereus)に対して抗菌効果を示すバクテリオシン、ロイテリシン6を改良MRS培地培養上清より最終ステップに逆相クロマトグラフィーを用いて単離・精製した。本バクテリオシンは、Tof-MSによる分子量測定では5,652、SDS-PAGEでは分子量約3,800の単一バンドとして泳動し、N末端アミノ酸配列分析は何らかの理由で解析は不可能であった。本結果はロイテリシン6が、同一ヒト乳児(4ヶ月齢)の糞便より分離したL.gas seri LA39株により生産される、リステリア、バチルス、黄色ブドウ球菌に対して幅広い抗菌効果を示すバクテリオシン、ガセリシンAに非常に類似していると考えられた。そこで、ガセリシンAの構造遺伝子(gaaA)を含む領域のプライマーを作成し、L. reuteri LA6株(プラスミドDNAは保有していなかった)の染色体DNAを鋳型としたPCRを行い、塩基配列を決定したところ、gaaAと全く同一の配列が得られた。次いで、化学的・酵素学的手法を用いて、精製ロイテリシン6を切断し、全アミノ酸配列を決定したところ、ロイテリシン6は、ガセリシンAと一次構造上では区別の付かない全く同一の、NC末端がリンクした環状バクテリオシンであることが判明した。本結果は、分離源を同じとする、異種乳酸桿菌より、同一のバクテリオシンが生産される初めての知見であり、現在、両バクテリオシンの抗菌スペクトル等の性質上の相違点について解析を進めている。これらの知見は、遺伝子改変を用いずに、自然界の乳酸菌で効果的な抗菌スペクトルを有するバクテリオシンの作出が可能であることを示唆している。

Lactobacillus reuteri LA6 strains isolated from milk (2 months old) faeces were used for production and purification of Bacillus cereus. The molecular weight of this product is 5,652 by Tof-MS, the molecular weight of this product is about 3,800 by SDS-PAGE, and the reason why N-terminal amino acid alignment analysis is impossible to explain. The results showed that L.gas seri LA39 strain was isolated from faeces of the same breast milk (4 months old), and its antibacterial activity was very similar to that of L.gas seri LA39 strain. A structural gene (gaaA) is a gene that contains the domain of a gene. reuteri LA6 strains (including the chromosome DNA) were identified by PCR and the nucleotide sequence was determined by DNA sequencing. Second, chemical and enzymatic methods are used to determine the sequence of acids, refine them, and determine the sequence of acids. The results showed that the source of isolation was the same, the heterogenous Lactobacillus was different, the same species was different from the original production, the present species was different from the original production, and the antibacterial species was different from the original production. This knowledge is reflected in the use of genetic modification, and the antibacterial properties of lactic acid bacteria in nature are shown in this paper.

项目成果

Y.Kawai et al.: "Lactobacillus reuteri LAb and Lactobacillus gasseri LA39 molated from faeces of the same human infant produce identical cyclic bacteriocin"Food Microbiology. 18. 407-415 (2001)

Y.Kawai 等人：“从同一人类婴儿的粪便中提取的罗伊氏乳杆菌 LAb 和格氏乳杆菌 LA39 产生相同的环状细菌素”食品微生物学。

Y.Kawai et al.: "Primary Amino Acid and DNA Sequences of Gassericin T, a Lactacin F-Family Bacteriocin Produced by Lactobacillus gasseri SBT2055"Biosci.Biotechnol.Biochem.,. 64(10). 2201-2208 (2000)

Y.Kawai 等人：“Gassericin T 的主要氨基酸和 DNA 序列，Gassericin T 是由格氏乳杆菌 SBT2055 产生的乳糖素 F 族细菌素”Biosci.Biotechnol.Biochem.,。