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破骨細胞分化制御因子の統合的解析-RANK/NFkBとc-fosとの相互作用-

破骨细胞分化调节因子的综合分析 - RANK/NFkB与c-fos之间的相互作用 -

基本信息

批准号：
12770060
负责人：
井上大輔
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770060/
关键词：
破骨細胞 AP-1 NF-kB 転写因子細胞分化

项目摘要

1.ヒト前骨髄球性白血病細胞株であるHL-60を活性型ビタミンDおよびTPAで刺激することにより破骨細胞/マクロファージ系への分化を誘導すると、RANK mRNAの発現が著明に誘導された。2.上記のRANK発現誘導は機能的なRANKタンパクの細胞膜への発現を伴うことがMBP-RANKLを用いたin vitro結合アッセイにより確認された。3.この分化誘導刺激の際、gel shift assayでみたAP-1結合能の活性化がRANKの発現にやや先立って起こった。4.上記のAP-1の活性化はc-fosの発現そのものの上昇をも伴っていた。5.上記の如くRANKの発現を誘導したHL-60細胞をRANKLで刺激すると、AP-1およびNF-kB活性が上昇することがgel shift assayにより確認された。6.分化誘導によりRANKを発現したHL60-細胞をRANKLで刺激するとRANK自身の発現がmRNAおよびタンパクレベルで増加した。7.c-fos遺伝子ノックアウトマウスの脾細胞をM-CSF存在下で培養すると、RANK陽性の破骨細胞前駆細胞が得られた。これをRANKLで刺激すると程度は弱いものの、AP-1、NF-kBの活性化が認められた。以上の検討により、c-fosはRANKの発現そのものやRANKによるAP-1,NF-kBの活性化には必須でないことが明らかとなった。また、RANKLがRANK自身の発現を誘導するpositive feedbackにより破骨細胞分化が進行していく可能性が示された。RANKLの直接の標的遺伝子は他には知られておらず、RANKプロモーターはRANKLシグナルおよびこれにおけるc-fosの特異性を解析する有力なtoolとなり得るものと考えられた。

1. HL-60 cell line was activated by TPA, and the expression of RANK mRNA was induced by TPA. 2. The above RANK expression induction function is confirmed by MBP-RANKL in vitro. 3. The activation of AP-1 binding energy during differentiation induction and gel shift assay, and the development of RANK were investigated. 4. The activation of AP-1 and the development of c-fos are described above. 5. Note that the expression of RANK was induced in HL-60 cells by RANKL stimulation, and the activity of AP-1 and NF-kB was increased by gel shift assay. 6. RANKL stimulates HL60-cells to express RANK during differentiation induction, and the expression of RANK itself increases in mRNA and protein. 7.C-fos gene expression was detected in spleen cells cultured in the presence of M-CSF, and RANK positive osteoclast precursor cells were obtained. The activation of AP-1 and NF-kB in RANKL was also observed. In the above discussion, c-fos and AP-1 are essential for RANK activation. RANKL induces the expression of RANK itself, and positive feedback indicates the possibility of osteoclast differentiation. RANKL's direct target gene is a powerful tool for analyzing the specificity of RANKL's target gene.