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新たに発見された愛知ウイルスの感染性cDNAを利用した非構造タンパク質の機能解析

使用新发现的爱知病毒感染性 cDNA 对非结构蛋白进行功能分析

基本信息

批准号：
12770159
负责人：
佐々木潤
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770159/
关键词：
ピコルナウイルス Leader protein 2A protein RNA replication

项目摘要

愛知ウイルスは、急性胃腸炎関連の新規ピコルナウイルスである。本研究は、愛知ウイルスの非構造タンパク質、特にL、2Aタンパク質の機能を調査し、下痢発症の機構についての知見を得ることを目的としている。昨年度は愛知ウイルスの感染性cDNAクローンのL、2Aタンパク質コード領域に欠失変異を導入し、ウイルス増殖に与える影響を調査した。その結果、L領域欠失変異体、2A領域欠失変異体ともにウイルスRNAが複製しなかったことから、愛知ウイルスのLおよび2AがRNA複製に必須のタンパク質であることが明らかとなった。本年度はLおよび2Aにおける、ウイルスRNAの複製に重要な領域を調査した。Lタンパク質170アミノ酸のうちの4-53、4-92、73-163、114-163番目のアミノ酸を欠失したLを発現するような変異体を作製し、これらのRNA複製能を調査したところ、114-163番目のアミノ酸を欠失させた場合のみRNAの複製が認められた。このことから、Lの機能に重要な領域はN末端側113アミノ酸に存在することが分かった。最近、愛知ウイルスの2Aのアミノ酸配列には、細胞増殖の制御に関わる細胞タンパク質、H-rev107ファミリーで保存されている配列モチーフが認められることが報告された。H-rev107ファミリーで保存されているモチーフのうち、アスパラギン-システイン・モチーフ(NCモチーフ)をアラニン-アラニンに置換した2Aをコードする変異体および、疎水性アミノ酸領域を欠失した2Aをコードする変異体を作製し、これらのRNA複製能を調査した。その結果、NCモチーフ変異体は野生型のRNAに比べてRNAの複製が遅いこと、また、疎水性アミノ酸領域を欠失した変異体は複製しないことが明らかとなった。以上のことから、愛知ウイルスの2Aタンパク質にみられるH-rev107ファミリーのアミノ酸配列モチーフは、ウイルスRNAの複製に重要であることが示された。

Aichi, acute gastroenteritis related to the new rules This study aims to investigate the non-structural characteristics of the disease, investigate the function of L and 2A characteristics, and investigate the mechanism of diarrhea. Last year, we investigated the effects of the introduction, amplification, and deletion of infectious cDNA fragments in the L, 2A, and C domains. As a result, the L domain is missing, the 2A domain is missing, and the RNA replication is required. This year, we are investigating important areas of RNA replication. The RNA replication ability of L-170 was investigated in 4-53, 4-92, 73-163, 114 - 163, 17 The function of L is important in the N terminal side. Recently, Aichi has reported that the 2A of the cell line is related to the regulation of cell proliferation, and the cell line is related to the preservation of H-rev107. H-rev107: RNA replication activity was investigated in the study of RNA replication activity in the H-rev107: RNA replication activity was investigated in the H-rev 107: RNA replication activity was investigated in the H-rev 107: RNA replication activity was investigated in the H-rev 107: RNA replication activity. As a result, the NC gene was cloned into the wild-type RNA, and the RNA was cloned into the wild-type RNA, and the RNA was cloned into the wild-type RNA. The above is an indication of the importance of RNA replication.