アイチウイルスの複製に関与するウイルスタンパク質および宿主タンパク質の機能解析

爱知病毒复制涉及的病毒和宿主蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
18790328
负责人：
佐々木潤
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790328/
关键词：
アイチウイルス複製複合体ピコルナウイルスゲノム複製

项目摘要

アイチウイルスは、胃腸炎関連のピコルナウイルスである。本研究は、アイチウイルス複製複合体形成に関わるタンパク質や複製複合体中でのタンパク質の役割を明らかにすることを目的とする。今年度は 1)非構造タンパク質の一つ、L タンパク質の機能解析、2)哺乳類ツーハイブリッドシステムを利用した非構造タンパク質同志の相互作用解析を行った。1)L タンパク質の機能解析:我々はこれまでに、L タンパク質がポリプロテインの一部として存在している間に、複製複合体形成のために重要な働きをしている可能性を示した。今年度はこの可能性を検討する目的で、L タンパク質がプロセッシング前のポリプロテインの細胞内局在におよぼす影響を調査した。その結果、L を含むポリプロテインは、感染細胞におけるゲノム複製部位の局在と類似して、細胞質にdot 状に存在した。一方、L を含まないポリプロテインは、細胞質の核周囲に存在したが、dot は形成しなかった。以上の結果は、L タンパク質は翻訳直後、ポリプロテインの一部として存在している間にポリプロテインの細胞内局在を決定し、複製複合体形成を効率良く導いていることを示唆する。2)非構造タンパク質同志の相互作用解析:哺乳類ツーハイブリッドシステムを利用して、アイチウイルスの非構造タンパク質とその切断中間産物L、2A、2B、2BC、2C、3A、3AB、3C、3CD、3Dの全ての組み合わせの相互作用を検討した。その結果、5つのタンパク質におけるホモニ量体形成、24ペアのヘテロ二量体形成を観察した。今回調べたタンパク質の全てが、少なくとも一種類と相互作用を示した。検出された相互作用には、他のピコルナウイルスでは確認されていない組み合わせも含まれていた。今後、検出された各相互作用について、複製複合体形成やウイルス複製における意義を調査する考えである。

Aichivivirus是一种与胃肠炎相关的picornavirus。这项研究旨在阐明蛋白质在复制复合复合物中涉及的蛋白质和蛋白质的形成。今年，我们进行了1）L蛋白，一种非结构蛋白的功能分析，以及2）使用哺乳动物两杂交系统对非结构蛋白同志的相互作用分析。 1）L蛋白的功能分析：我们已经显示出L蛋白在复制复合物的形成中可能起重要作用，而作为多蛋白的一部分。今年，我们研究了L蛋白在加工前对多蛋白的亚细胞定位的影响。结果，含有L的多蛋白在细胞质中类似点样，类似于受感染细胞中基因组复制位点的定位。另一方面，不包含L的多蛋白在细胞质核周围存在，但没有形成点。上述结果表明，L蛋白在翻译后立即确定多蛋白的亚细胞定位，而作为多蛋白的一部分，有效地导致了复制复合复合络合物的形成。 2）非结构蛋白同志的相互作用分析：我们研究了AICHIVIRUS非结构蛋白的所有组合及其裂解中间体L，2A，2B，2B，2C，2C，2C，2C，3A，3AB，3C，3C，3CD和3D，使用哺乳动物的两种哺乳动物的两型杂种系统。结果，在五种蛋白质中观察到同二聚体形成和24对异二聚体形成。这项研究中检查的所有蛋白质都显示至少一种类型的相互作用。检测到的相互作用还包括其他Picornaviruses未证实的组合。该计划是研究将来每个检测到的相互作用在复制复制形成和病毒复制中的重要性。