ポリ(ADP-ribose)ポリメラーゼ阻害剤による気管支喘息治療の基礎的検討

聚(ADP-核糖)聚合酶抑制剂治疗支气管哮喘的基础研究

• 批准号: 12770304
• 负责人: 青木 薫
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770304/
• 关键词: poly(ADP-ribose)polymerase; NF-kB; OVA感作喘息ラット; 3-Aminobenzamide; electrophoretic mobility shift assay; IL-1β; TNF-α; A549細胞; luciferase reporter assay

平成13年度は、ovalbumin(OVA)感作喘息ラットを用い、in vivoにおけるネブライザーによるポリ(ADP-ribose)ポリメラーゼ(PARP)阻害剤のNF-kBの活性化の抑制、さらには気道炎症の改善の程度を検討した。OVA感作喘息ラットは、腹腔内へのOVA3日間連続投与にて作製した。感作ラットへのさらなるOVAの気道投与がNF-kBの活性化、さらには気道の炎症をもたらすことが報告されており、i)OVA投与のみ、ii)OVA+PARP阻害剤投与、iii)コントロール1(OVA感作+生食投与)、iv)コントロール2(生食感作+生食投与)の4群に分け、投与後1,2,4,6hrの間隔で屠殺、両肺のホモジュネートより核蛋白を抽出し、NF-kBのプローブを用い、electrophoretic mobility shift assayを施行した。内部コントロールとして抗原刺激およびPARP阻害剤の影響を受けない転写因子であるSP-1のプローブにより得られたbandのintensityとの比較により、阻害の程度を検討した。1%のOVAを15分間吸入し、PARP阻害剤として、3-aminobenzamideを10mg/kgの濃度でOVA吸入投与1hr前に投与したところ、OVA+PARP阻害剤投与群において投与後1,2hrにおいてNF-kBのband intensityが約1/3に減弱した。さらに、同様に4群を用い、刺激後、1および4時間後に屠殺後、両肺よりmRNAを抽出後、Northern analysisによりIL-1β,TNF-αの発現量を比較したところ、刺激後、1hrにおいて両サトカインの発現が約1/2に減弱した。以上の結果より、in vivoにおいて、PARP阻害剤がNF-kBのDNA結合を抑制することにより、炎症性サイトインの発現を減弱させることが明らかにされ、気管支喘息の新しい治療となりうることが示唆された。

In 2013, the inhibition of NF-kB activation by ovalbumin(OVA)-induced wheezing, in vivo. OVA is caused by asthma, abdominal cavity and OVA3. During the day, it is continuously injected and controlled. OVA pathway activation and NF-kB activation, OVA pathway inflammation, OVA pathway inhibition, OVA + PARP pathway inhibition, OVA pathway inhibition, OVA + PARP pathway inhibition, OVA pathway inhibition, OVA+PARP pathway inhibition, OVA pathway inhibition, OVA pathway inhibition,(OVA induction + raw food administration), iv) 4 groups of Crotone 2(raw food induction + raw food administration) were divided into 4 groups and killed at intervals of 1,2,4,6hr after administration. The nuclear protein was extracted, NF-kB was used, and the electrophoretic mobility shift assay was performed. The intensity of the band was compared between SP-1 and PARP. 1% OVA 15 minutes after inhalation, PARP inhibitor 10mg/kg, OVA+PARP inhibitor 1 hr before inhalation, NF-kB band intensity 1/3 after inhalation The expression of IL-1β and TNF-α was reduced by about 1/2 after stimulation, 1 hour after slaughter, 1 hour after extraction of TNF-α mRNA, and Northern analysis. These results indicate that PARP inhibitors inhibit NF-kB DNA binding in vivo, and that the development of inflammatory cytokines is attenuated.