肺胞再生の分子機序の解析による肺気腫症の再生治療の基礎的研究

分析肺泡再生的分子机制进行肺气肿再生治疗的基础研究

• 批准号: 14570564
• 负责人: 青木 薫
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14570564/
• 关键词: 肺気腫; レチノイン酸; 再生治療; cDNA microarray法

肺気腫症の、肺胞再生を目指した再生治療にむけての第一段階として、レチノイン酸(retinoic acid : RA)により惹起される肺胞形成において発現調節を受ける遺伝子群を同定し、さらにニコチン投与が、それら遺伝子群の発現、さらには肺胞の形成に及ぼす影響を詳細に検討することを目的とし、今年度は、in vitroで、肺を構成する諸細胞の細胞株を用い、all-trans-retinoic acid (t-RA)投与により、発現調節される遺伝子群をcDNA microarray法にて同定した。細胞株として、ヒト肺線維芽細胞であるWI38、ヒト単球様細胞であるU937細胞を用い、以下のようなcDNA microarray法により検討した。培養細胞の上清中にt-RAを低濃度から高濃度まで異なった濃度で加え、t-RA刺激培養後、トータルRNAを抽出し、ランダムヘキサマープライマーと^<33>PでラベルしたdCTPを用い、逆転写酵素により、cDNAプローブを作製、つぎに、コントロールとしてt-RAの溶媒である綿実油のみを添加した細胞(無刺激)から同様の操作を行い、t-RA刺激ならびに無刺激の培養細胞から得られた2種類のcDNAプローブを用いてあらかじめ8000個以上のヒト遺伝子がオリゴヌクレオチドとして吸着されたメンブレンとハイブリダイゼイションを施行し、発現の差の認められた遺伝子群を同定したところ、複数の増殖あるいは成長因子において、t-RA刺激により発現の強弱が認められた。変化の認められた遺伝子に関しては、遺伝子特異的なプライマーを用いたsemi-quantitative PCRにより確認した。

The first stage of lung cancer treatment, lung cell regeneration, and regeneration therapy (retinoic acid : RA) cell lines for the development and regulation of lung cell formation, lung tissue formation, lung tissue, lung tissue, lung tissue, All-trans-retinoic acid (t-RA) gene expression was determined by cDNA microarray. Cell lines, lung cells, U937 cells, cDNA microarray t-RA in the supernatant of cultured cells from low concentrations to high concentrations, different concentrations, addition of t-RA, stimulation of t-RA after culture, extraction of RNA<33>, reverse transcription of enzymes, cDNA production, detection of t-RA, solvent addition of oil to cells (no stimulation), the same operation, t-RA stimulation and non-stimulation of cultured cells, two types of cDNA fragments were obtained, and more than 8000 cDNA fragments were obtained. t-RA stimulation is strong and weak. A semi-quantitative PCR was used to confirm the identity of the gene.