糖尿病性神経障害における非酵素的糖化反応の影響と治療

非酶糖基化反应对糖尿病神经病变的影响及治疗

基本信息

批准号：
12770645
负责人：
加藤宏一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度の報告では、培養シュワノーマ細胞(JS1細胞)において高グルコースによりPKCα膜分画タンパク発現量が減少することを明かとした。PKCの下流に存在すると考えられるMitogen activated protein kinase(MAPkinase)活性に対する高グルコースの影響を検討したところ、リン酸化ERK1/2の発現量には変化が認められなかったが、リン酸化p38発現量が有意に低下した。この低下はアルドース還元酵素阻害剤により改善されたことから、神経系細胞ではポリオール代謝異常を介してPKCαさらにはMAPkinase活性が低下し神経機能異常が起こる可能性が明かとなった。糖尿病状態における非酵素的糖化反応、酸化ストレスにより糖尿病末梢神経の神経構成成分におけるPKCアイソフォーム発現性の異常が想定されることから、糖尿病ラットの坐骨神経におけるPKCアイソフオーム発現性に関して免疫組織学的検討を行った。Wistar系雄性正常ラットを用い、STZの腹腔内投与により糖尿病ラットを作成し、12ヶ月飼育後に坐骨神経を摘出、抗ラットPKCαおよびβ1・β2抗体を用いて免疫組織染色を行い、光顕下にて組織の染色性と局在を判定、さらに各抗体陽性神経血管の計測を行った。PKCα:シュワン細胞において強度の染色性が、神経軸索では中等度の染色性が認められた。神経束内微小血管においては軽度の染色性が認められた。糖尿病ラットと正常ラットの染色性には差が認められなかった。PKCβ1およびβ2:正常ラットおよび糖尿病ラットともにシュワン細胞には中等度の染色性を、神経軸索には弱い染色性が観察された。神経束内微小血管ではPKCβ1とβ2の中等度の染色性を認めたが、微小血管におけるPKCβ1と2染色性を半定量したところ、正常ラットに比し糖尿病ラットにおいて中等度から強度陽性血管の割合が増加傾向であった。これらのことから末梢神経組織におけるPKCアイソフォームの局在および発現量はその構成組織によって異なり、高血糖による変化にも組織特異性が存在する可能性が示唆された。

去年的一份报告显示，高葡萄糖降低了培养的切瓦尼瘤细胞（JS1细胞）中PKCα膜分数蛋白的表达。当我们研究高葡萄糖对被认为位于PKC下游的有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPKINase）活性的影响时，磷酸化的ERK1/2表达水平没有变化，但是磷酸化的P38表达水平显着降低。通过醛糖还原酶抑制剂改善了这种降低，并且已经发现PKCα和MAPINKISE活性可能通过多元代谢异常在神经系统细胞中降低，从而导致神经性功能障碍。由于糖尿病态中的非酶糖基化反应和氧化应激导致外周糖化神经神经成分中PKC同工型表达异常，因此对糖尿病研究中PKC同工型的表达进行了免疫组织化学研究。使用Wistar雄性正常大鼠通过腹膜内给予STZ制备糖尿病大鼠，在饲养12个月后，去除坐骨神经，进行免疫组织化学染色，使用抗RATPKCα和β1和β2抗体进行抗RATPKCα和β2抗体，并在光谱范围内确定了呈阳光均方的呈阳光，并确定了Neurovasty patibroscy和Neurovasty的效果。在PKCα：schwann细胞中观察到了强染色，并且在神经轴突中观察到中等染色。在微血管闭合束中观察到轻度染色。在糖尿病和正常大鼠之间染色时未观察到差异。 PKCβ1和β2：在正常和糖尿病大鼠的Schwann细胞中观察到中度染色，并且在神经轴突中观察到弱染色。与正常大鼠相比，确定微血管中微血管的PKCβ1和β2染色在神经束中的微血管中观察到了中等的PKCβ1和β2染色，但是与正常大鼠相比，微血管中的中度血管的比例增加。这些结果表明，外周神经组织中PKC同工型的定位和表达水平取决于组成组织，这表明组织特异性也可能存在于高血糖引起的变化中。