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渦鞭毛虫類に於ける非ヒストン性核タンパクの分布と機能

甲藻中非组蛋白核蛋白的分布和功能

基本信息

批准号：
06839023
负责人：
加藤宏一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至 1995
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06839023/
关键词：
Dinoflagellata Oxyrrhis marina nuclear protein amino acid sequence gene cloning

项目摘要

・非ヒストン性核タンパクの性状室内培養したハダカフタヒゲムシ(渦鞭毛虫類)より核を分離し、硫酸法により塩基性核タンパクを抽出した。これをHPLCで分画し流出パターンのピーク部分よりSDS-PAGEで単一バンドとなるタンパクを得た。本タンパクは分子量が約23kDで、既知のヒストンとは明らかに異なっていた。アミノ酸組成分析ではリジンおよびアラニンがともに30%近くを占めていた。N末端側のアミノ酸配列を調べた結果16番目までが明らかとなり、既知の全タンパクとの相同性を調べたところ50%以上の相同性を持つタンパクは皆無であった。この時点で本タンパクを渦鞭毛虫主要核タンパク(DINP)と呼ぶ事とした。・DINPの核内における局在性精製タンパクを用いてウサギでポリクローナル抗体を作成した。得られた抗血清はオクタロニ-およびウエスタンブロッティング的に、DINP特異的であった。ホルマリン固定全載標本で間接蛍光抗体染色を行ったところ、DINPは核に局在していた。さらに詳しい局在性を調べるため、金コロイド免疫電顕法を行ったところ、DINPは核内染色体上に局在していることが明らかとなった。分裂期と間期における局在性の差異は見られなかった。以上の結果は日本動物学会第66回大会(Zool.Sci.,12,Suppl.,26,1995)において発表した。現在アミノ酸配列の再確認を行っており、この結果を待って遺伝子のクローニングに移る準備を進めている。当初の計画であった他種における本タンパクの在否のスクリーニングについては、未だ結果が出ておらず今後精力的に進めたい。

Non-fertile sex nuclei were isolated and isolated by sulfuric acid method, and basic nuclei were extracted by sulfuric acid method. The "HPLC" is divided into two parts: the flow out of the window, the part of the SDS-PAGE, the part of the picture, the part of the picture, the part of the part, the part of the drawing, the part of the drawing. The molecular weight of this compound is about 23kD, and it is known that the molecular weight is low. The acid composition analysis shows that 30% of the total population occupies a large proportion of the total population. The results of the N-terminal antisense acid configuration show that there are no significant differences between the two groups, and it is known that they are more than 50% homologue in terms of homology. At some point in time, we will call for help from the main nucleus of flagellates (DINP). In the nucleus of DINP, the antigens were made with antibodies in the nucleus. The antiserum, anti The whole headers are fixed and then the light antibody staining line is used. The DINP nuclear bureau is in the center of the test. In the treatment of sex, gold, immuno-electricity, and DINP, the chromosomes in the nuclei of the mice were detected in each other. During the period of division, there was a lot of sex in the period of division. As a result of the above results, the Japanese Animal Society returned to the General Assembly (Zool.Sci.,12,Suppl.,26,1995) in 66. Now, please confirm that you are going to make sure that you are going to make sure that you are going to make a decision, and the results are waiting for you to prepare for further improvement. At the beginning, it was planned to make a difference between the two groups, but the results did not show the improvement of energy in the future.