渦鞭毛虫類に於ける非ヒストン性核タンパクの分布と機能

甲藻中非组蛋白核蛋白的分布和功能

基本信息

批准号：
06839023
负责人：
加藤宏一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至 1995
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06839023/
关键词：
Dinoflagellata Oxyrrhis marina nuclear protein amino acid sequence gene cloning

项目摘要

・非ヒストン性核タンパクの性状室内培養したハダカフタヒゲムシ(渦鞭毛虫類)より核を分離し、硫酸法により塩基性核タンパクを抽出した。これをHPLCで分画し流出パターンのピーク部分よりSDS-PAGEで単一バンドとなるタンパクを得た。本タンパクは分子量が約23kDで、既知のヒストンとは明らかに異なっていた。アミノ酸組成分析ではリジンおよびアラニンがともに30%近くを占めていた。N末端側のアミノ酸配列を調べた結果16番目までが明らかとなり、既知の全タンパクとの相同性を調べたところ50%以上の相同性を持つタンパクは皆無であった。この時点で本タンパクを渦鞭毛虫主要核タンパク(DINP)と呼ぶ事とした。・DINPの核内における局在性精製タンパクを用いてウサギでポリクローナル抗体を作成した。得られた抗血清はオクタロニ-およびウエスタンブロッティング的に、DINP特異的であった。ホルマリン固定全載標本で間接蛍光抗体染色を行ったところ、DINPは核に局在していた。さらに詳しい局在性を調べるため、金コロイド免疫電顕法を行ったところ、DINPは核内染色体上に局在していることが明らかとなった。分裂期と間期における局在性の差異は見られなかった。以上の結果は日本動物学会第66回大会(Zool.Sci.,12,Suppl.,26,1995)において発表した。現在アミノ酸配列の再確認を行っており、この結果を待って遺伝子のクローニングに移る準備を進めている。当初の計画であった他種における本タンパクの在否のスクリーニングについては、未だ結果が出ておらず今後精力的に進めたい。

- 非内酮核蛋白的特性，将细胞核与内部培养的Nama-Spirit甲虫（鞭毛藻）分离，并通过硫酸法提取碱性核蛋白。这是通过HPLC分离的，以获得从外排模式的峰值部分通过SDS-PAGE成为单个带的蛋白质。该蛋白的分子量约为23 kD，这与已知组蛋白显然不同。在氨基酸组成分析中，赖氨酸和丙氨酸均占近30％。 N末端的氨基酸序列揭示了16个位置，当研究了所有已知蛋白质的同源性时，没有蛋白质具有超过50％的同源性。在这一点上，该蛋白被称为鞭毛藻（DINP）的主要核蛋白。使用DINP核中局部纯化的蛋白质在兔子中产生多克隆抗体。由此产生的抗血清是DINP特异性的，无论是八钟还是Western blotting。间接荧光抗体染色在福尔马林固定形式的所有安装标本上进行，而DINP位于核中。为了进一步研究该定位，使用胶体金免疫电子显微镜来确定DINP的定位，并且发现DINP位于核染色体上。没有发现有丝分裂和相间之间的定位差异。上述结果在日本动物学学会第66届会议上提出（Zool.Sci。，12，Suppl。，26，1995）。我们目前正在重新启用氨基酸序列，并准备在等待该结果后继续克隆基因。尚未制定筛查该蛋白质存在的最初计划，我们希望将来大力进行。