悪性軟部腫瘍における腫瘍特異的転座遺伝子産物を標的とした抗腫瘍免疫の誘導

通过靶向恶性软组织肿瘤中肿瘤特异性易位基因产物诱导抗肿瘤免疫

• 批准号: 12770791
• 负责人: 川口 哲
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770791/
• 关键词: 免疫療法; 悪性軟部腫瘍; 遺伝子転座; 滑膜肉腫; SYT-SSX; 合成ペプチド

1.SYT-SSX合成ペプチドの作製:SYT-SSXのアミノ酸配列のうち、日本人に最も多いHLA-A24と結合する領域を同定した。SYT-SSX転座領域よりSS391ペプチド(PYGYDQIMPK)とSS393ペプチド(GYDQIMPKK)を合成し、SSX領域よりSS449bペプチド(AWTHRLRER)とSS4496ペプチド(AWTHRLRERK)を合成した。2.HLA-A24テトラマーによるペプチド特異的CTLの検出:HLA-A24/ペプチドテトラマーを作製した。HLA-A24陽性の症例(滑膜肉腫16例、滑膜肉腫以外の骨軟部肉腫患者10例、健常者10例)を解析の対象とし、テトラマーと反応するTリンパ球をFlowcytometoryを用いて検出した。健常者では0例、滑膜肉腫以外の骨軟部肉腫患者では1例においてTリンパ球がテトラマーと反応していた。滑膜肉腫患者16例の解析では、遠隔転移の既往歴または現病歴がある9例中6例において、テトラマーと反応するTリンパ球が高頻度(0.25%以上)に存在した。3.合成ペプチドによるCTLの誘導:滑膜肉腫患者4例の末梢血から、(SS391+393)ペプチドまたは(SS449a+b)ペプチド刺激によるCTL誘導を行った。HLA-A24/ペプチドテトラマーと反応するTリンパ球が高頻度に存在する滑膜肉腫患者2例よりCTLが誘導された。CTLはペプチド特異的にC1R-A^*2402細胞を殺傷した。また、SYT-SSX遺伝子とHLA-A24の両方を発現する滑膜肉腫株(Fuji、HS-SYII)を殺傷した。以上の結果より、滑膜肉腫患者では遠隔転移に伴いSYT-SSXペプチドを認識するTリンパ球が増加し、ペプチド刺激によりCTLを誘導できることが明らかとなった。

1。SYT-SSX合成肽的制备：在SYT-SSX的氨基酸序列中，结合HLA-A24的区域（在日本人中最常见）。 SS391肽（PygyDQIMPK）和SS393肽（Gydqimpk）从SYT-SSX易位区域合成，SS449B肽（AWTHRTHRLRRE​​R）和SS4496肽（AWTHRRRERK）从SSX区域合成。 2。用HLA-A24四聚体检测肽特异性CTL：HLA-A24/肽四聚体。分析了HLA-A24阳性病例（16例滑膜肉瘤，10例非肌肉瘤病例，10例健康受试者的骨质骨病受试者和10例健康受试者），并使用流动性检测到与四聚体反应的T淋巴细胞。 T淋巴细胞与四名健康患者中的四聚体反应，另一名是滑膜肉瘤以外的骨病患者。在对16例滑膜肉瘤患者的分析中，有9例具有远处转移史或当前疾病史的患者中有6例与四聚体反应的T淋巴细胞高频（> 0.25％）。 3。用合成肽诱导CTL：通过刺激（SS391+393）或（SS449A+B）肽从四名滑膜肉瘤患者的外周血中进行CTL诱导。在两名滑膜肉瘤患者中诱导了CTL，其中经常存在与HLA-A24/肽四聚体反应的T淋巴细胞。 CTL在肽中特别杀死了C1R-A^*2402细胞。此外，杀死了表达SYT-SSX基因和HLA-A24的滑膜肉瘤菌株（Fuji，HS-Syii）被杀死。以上结果表明，在滑膜肉瘤的患者中，识别SYT-SSX肽的T淋巴细胞数量随远处转移而增加，并且CTL可以通过肽刺激诱导。