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内分泌攪乱物質によって発生初期に発現異常を示す遺伝子群のプロファイリング

对因内分泌干扰物而在发育早期表现出异常表达的基因进行分析

基本信息

批准号：
12780413
负责人：
黒瀬光一
金额：
$ 1.22万
依托单位：
国立公衆衛生院
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

まず、内分泌撹乱化学物質のモデル物質として、曝露により形態的な異常が現れることが報告されているエストラジオール(E2)を採用し、発生初期の研究に適したアフリカツメガエルの初期胚を使って、発現量の変動する遺伝子を蛍光ディファレンシャル・ディスプレイ法にて調べた。非曝露胚と曝露胚とを比べて変化しているバンドをフィンガープリント上に多数見出し、それらの一部については、クローン化を行い、どのような遺伝子由来の転写産物であるのかを調べた。その結果、鰻の一群のレクチンと相同性をもつ未知の遺伝子などを見出し、それらの全長塩基配列を決定する等の解析を進めた。次に、ディファレンシャルディスプレイ法に加えて、約1万スポットの塩基配列未決定cDNAから成るDNAマイクロアレイ法による解析を試みた。形態的異常がまだ顕現していない発生段階において、非曝露胚と曝露胚それぞれの総RNAを異なる蛍光色素で標識してプローブとして用いた。両者の相対的な発現量の比を求める事により、遺伝子発現に対する影響を網羅的に調べた。その結果、E2曝露により発現量の大幅に変動した転写産物は見いだされなかったが、E2曝露により大半の転写産物とは異なる挙動を取る一群の産物の存在が観察された。一方、工業用原料または歯科用素材の原料として広く利用されている化学物質であり、かつ、エストロゲン作用を有するところのビスフェノールAをツメガエル初期胚に曝露すると、E2曝露胚と類似の形態的異常を示すことが観察された。しかし、異常胚の切片標本像を詳細に解析した結果、ビスフェノールAで曝露した場合にのみ、発生が進むに連れ、中枢神経系特異的にアポトーシスが起きている事を新たに発見した。また、ビスフェノールA曝露胚に関しても、同様にDNAマイクロアレイ法による解析を行なったが、E2曝露胚とは異なる遺伝子発現分布をホすことが明らかになった。

The abnormal appearance of substances and forms of endocrine-disrupting chemicals is reported in the report (E2). The study of early development is suitable for the study of early development of endocrine-disrupting chemicals. Unexposed embryos are more likely to be exposed to light than exposed embryos. Most of them are found in the middle of the day. Some of them are found in the middle of the day. The analysis of the results, the identity of a group of eel, the identification of unknown genes, the determination of the total length of the gene, etc. The sequence of DNA fragments was analyzed by DNA sequencing. Morphological abnormalities are found in the development stage, non-exposed embryos and exposed embryos, which are identified by fluorescent pigments. The ratio of the relative occurrence of the virus to the occurrence of the virus is determined. As a result, the presence of a group of products was observed, with significant changes in the amount of E2 exposure and changes in the amount of E2 exposure. A raw material for industrial use and dental materials is used to detect abnormalities in chemical substances such as A, B, C, D, E, E The results of detailed analysis of abnormal embryo slice images show that there are new developments in the development of brain tissue and brain tissue. The distribution of gene expression in E2-exposed embryos is related to DNA homology analysis.