水チャネル(アクアポリン2)過剰発現ラットの作製によるSIADHの病態解析

通过创建过度表达水通道（水通道蛋白2）的大鼠来进行SIADH的病理分析

• 批准号: 13877169
• 负责人: 大磯 ユタカ
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877169/
• 关键词: 腎性尿崩症; アクアポリン2; トランスジェニックラット; SIADH

我々は本研究においてバゾプレシン不適合分泌症候群(SIADH)のモデル動物の確立及び腎性尿崩症の遺伝子治療の開発を目的として、アクアポリン2(AQP2)過剰発現トランスジェニックラットの作製を計画した。そこでまず、AQP2及びバゾプレシンV2受容体(V2R)の遺伝子を組み込んだ発現ベクターを作製し、動物個体に投与して体内で発現させることを試みた。ラットの腎髄質よりRNAを抽出し、RT-PCRでAQP2およびV2Rの全長cDNAを得た。これを、TA cloningで増幅し、autosequencerで塩基配列を確認した後、発現ベクターであるpcDNAに組み込んだ。この段階で目的とする蛋白が発現されるかをReticulocyte Lysate systemを用いたin vitro translationで確認した。次いで、実際に個体で発現させるべく、このDNAをラット及びマウスの大腿四頭筋に注射した。注射は週に1回、計5回行った。最終注射の2週間後に動物より筋組織を採取した。現在、筋組織でのV2R及びAQP2のmRNAと蛋白の発現をWestern blotting及びNorthern blottingにて検討を行っている。また筋で蛋白が発現すればそれに対する抗体が産生される可能性があるので、血清を採取しAQP2及びV2Rに対する抗体の出現を観察中である。次の段階としては、このDNAを腎動脈より、あるいは尿路から逆行性に投与して腎での発現を試みる予定である。腎での発現が認められれば、生体内でのAQP2及びV2Rの機能の再現が可能と考えられ、SIADHモデルとしての使用、あるいは腎性尿崩症の遺伝子治療への応用が期待される。

I 々 は this study に お い て バ ゾ プ レ シ ン syndrome of is not suitable for secretion (SIADH) の モ デ ル animal の established and び kidney diabetes insipidus の heritage 伝 son treatment の open 発 を purpose と し て, ア ク ア ポ リ ン 2 (AQP2) turning 発 now ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク ラ ッ ト の cropping を plan し た. そ こ で ま ず, AQP2 and び バ ゾ プ レ シ ン V2 by let body (V2R) の posthumous son 伝 を group み 込 ん だ 発 now ベ ク タ ー を し, animal individual に cast and し て in vivo で 発 now さ せ る こ と を try み た. The よ よ RNA of the ラット renal medulla を was extracted, and the full-length cDNA of the よ RT-PCRでAQP2およびV2R is を to obtain た. こ れ を, TA cloning で raised し, autosequencer で salt base with column を confirm し た, 発 now ベ ク タ ー で あ る pcDNA に group み 込 ん だ. こ の Duan Jie で purpose と す る protein が 発 now さ れ る か を Reticulocyte Lysate system を with い た in vitro translation で confirm し た. Time い で, be interstate に individual で 発 now さ せ る べ く, こ の DNA を ラ ッ ト and び マ ウ ス の thigh quadriceps muscle に injection し た. Inject に once every week, for a total of 5 lines った. Two weeks after the final injection, に animal よ tendon tissue を was taken た た. Now, muscle tissue で の V2R and び AQP2 の mRNA と protein の 発 を now Western blotting and び Northern blotting に て 検 line for を っ て い る. ま た muscle protein で が 発 now す れ ば そ れ に す seaborne antibodies る が さ れ る possibility が あ る の で, serum を take し AQP2 and び V2R に す seaborne る antibodies appear の を 観 examine the で あ る. Time の Duan Jie と し て は, こ の DNA を renal artery よ り, あ る い は urinary か ら retrograde に cast with し て renal で の 発 を now try み る designated で あ る. Renal で の 発 が now recognize め ら れ れ ば, born in vivo で の AQP2 and び V2R の function の reappearance が possible と え ら れ, SIADH モ デ ル と し て の use, あ る い は nonglomerular diabetes insipidus の heritage 伝 son treatment へ の 応 with が expect さ れ る.

项目成果

H Yokoi: "Adaptation to sustained high plasma vasopressin in water and electrolyte homeo-stasis in rat transgenic for metallothionein-vasopressin fusion gene"J Endocrinology. (in press).

H Yokoi：“金属硫蛋白-加压素融合基因转基因大鼠对水和电解质稳态中持续高血浆加压素的适应”J Endocrinology。

Y.Yambe: "Diurnal changes in arginine vasopressin gene transcription in the rat suprachiasmatic nucleus"Mol Brain Res. (in press).

Y.Yambe：“大鼠视交叉上核中精氨酸加压素基因转录的昼夜变化”Mol Brain Res。

H.Nagasaki: "Overexpression of vasopressin in rat transgenic for metallo thionein-vasopressin fusion gene"J Endocrinol. 173. 35-44 (2002)

H.Nagasaki：“金属硫因-加压素融合基因转基因大鼠中加压素的过度表达”J Endocrinol。

H Nagasaki: "Overexpression of vasopressin in rat transgenic for metallo-thionein-vasopressin fusion gene"J Endocrinology. (in press).

H Nagasaki：“金属硫蛋白-加压素融合基因转基因大鼠中加压素的过度表达”J Endocrinology。

S.Ishizaki: "Role of ghrelin in the regulation of vasopressin release in conscious rats"Endocrinol. 143. 1589-1593 (2002)

S.Ishizaki：“生长素释放肽在调节清醒大鼠加压素释放中的作用”内分泌。