Naチャネル活性化因子プロスタシンのノックアウトマウスによる解析

敲除小鼠中 Na 通道激活剂前列腺素的分析

• 批准号: 13877166
• 负责人: 冨田 公夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877166/
• 关键词: Naチャネル; 血圧; 腎機能; アルドステロン; K; ENaC; プロスタシン; セリンプロテアーゼ; 尿中Na排泄

腎臓におけるNa代謝は体液の恒常性や血圧をコントロールする上で最も重要な役割を担っている。腎臓でのNa再吸収において重要な働きをしているのが上皮性Naチャネル(ENaC)である。このENaCはNa代謝異常や高血圧を引き起こす病態において関与していることが知られている。ENaCの活性はアルドステロンやADHなどのホルモンによりコントロールされていることが知られているが、分子生物学的なENaCの活性化機構については未だ不明な点が多い。1998年に私たちはラット腎臓より新しいセリンプロテアーゼであるプロスタシンのcDNAクローニングに成功した。このセリンプロテアーゼはヒトおよびラットにおいて腎臓に強く発現し、その他前立腺、大腸、胃、肺、皮膚などのENaCが発現している上皮性組織に低レベルの発現を認めた。また、抗プロスタシン抗体による免疫染色では腎臓の上皮細胞管腔側の細胞膜に発現を認め、尿中にもその存在を認めている。さらに私たちはアフリカツメガエルの卵母細胞にENaCとプロスタシンを発現させることにより、プロスタシンがENaCを活性化することを世界で初めて証明した(J.Am.Soc.Nephrol.,2001)。更にアルドステロンにより刺激されることも報告した(J.C.I.,2002)。これらの結果はプロスタシンが生体におけるENaCを介したNa再吸収に重要な働きをしていることを示唆するが、プロスタシンの生体における生理学的意義および各種病態における関与を個体レベルで解明した研究は知られていない。本研究の目的はプロスタシン遺伝子のノックアウトマウスを作成し、プロスタシンの生理学的役割を個体レベルで解析することにある。現在、1)マウスゲノムBACクローンライブラリーをスクリーニングし、マウスプロスタシンゲノムを含むBACクローンを単離した。2)制限酵素とパルスフィールド電気泳動およびサザンブロッティングを用いてヒトプロスタシンゲノムの制限酵素地図を作成した。など計画は進行中である。

Renal viscera に お け る Na metabolism は humoral の constancy や blood 圧 を コ ン ト ロ ー ル す る で も most important な "を cut bear っ て い る. Renal viscera で の Na take 収 に お い て important な 働 き を し て い る の が epithelial sex Na チ ャ ネ ル (ENaC) で あ る. こ の ENaC は Na metabolic abnormalities や high blood 圧 を lead き up こ す pathological に お い て masato and し て い る こ と が know ら れ て い る. ENaC の active は ア ル ド ス テ ロ ン や ADH な ど の ホ ル モ ン に よ り コ ン ト ロ ー ル さ れ て い る こ と が know ら れ て い る が, molecular biology of な ENaC の activeness institutions に つ い て は not だ が い more unknown な point. 1998 に private た ち は ラ ッ ト renal viscera よ り new し い セ リ ン プ ロ テ ア ー ゼ で あ る プ ロ ス タ シ ン の cDNA ク ロ ー ニ ン グ に successful し た. こ の セ リ ン プ ロ テ ア ー ゼ は ヒ ト お よ び ラ ッ ト に お い て renal viscera strong に く 発 し, そ の before he made gland, large intestine, stomach, lung, skin な ど の ENaC が 発 now し て い る epithelial tissue に low レ ベ ル の 発 を now recognize め た. ま た, resisting プ ロ ス タ シ ン antibody に よ る immune dyeing で は renal epithelial cell lumen side の perforatien の membrane に 発 を now recognize め, urine に も そ の is を recognize め て い る. さ ら に private た ち は ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル の oocytes に ENaC と プ ロ ス タ シ ン を 発 now さ せ る こ と に よ り, プ ロ ス タ シ ン が ENaC を activeness す る こ と を め the early で て prove し た (J.A Margaret spellings oc. Nephrol., 2001). Further にア, ドステロ, によ, によ and ドステロ stimulated される, た, と and た reports た(J.C.I.,2002). こ れ ら の results は プ ロ ス タ シ ン が raw body に お け る ENaC を interface し た Na take 収 に important な 働 き を し て い る こ と を in stopping す る が, プ ロ ス タ シ ン の raw body に お け る physiology significance お よ び various pathological に お け る masato and を individual レ ベ ル で interpret し た research は know ら れ て い な い. Purpose this study の は プ ロ ス タ シ ン heritage 伝 son の ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス を し, consummate プ ロ ス タ シ ン の physiology "を cut individual レ ベ ル で parsing す る こ と に あ る. Now, 1) マ ウ ス ゲ ノ ム BAC ク ロ ー ン ラ イ ブ ラ リ ー を ス ク リ ー ニ ン グ し, マ ウ ス プ ロ ス タ シ ン ゲ ノ ム を containing む BAC ク ロ ー ン を 単 from し た. Limitations 2) enzyme と パ ル ス フ ィ ー ル ド electric 気 swimming お よ び サ ザ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ を with い て ヒ ト プ ロ ス タ シ ン ゲ ノ ム limitations の enzymes to 図 を made し た. Youdaoplaceholder0 である project である in progress である.

项目成果

Narikiyo T.: "Regulation of prostasin by aldosterone in the kidney"J.Clin. Invest.. 109. 401-408 (2002)

Narikiyo T.：“肾脏中醛固酮对前列腺素的调节”J.Clin。

Narikiyo T., et al.: "Regulation of prostasin by aldosterone in the kidney."J.Clin.Invest.. 109. 401-408 (2002)

Narikiyo T. 等人：“肾脏中醛固酮对前列腺素的调节。”J.Clin.Invest.. 109. 401-408 (2002)

Iwashita, K., et al.: "Inhibition of prostasin secretion by serine protease inhibitors in the kidney."J.Am.Soc.Nephrol.. 14. 11-16 (2002)

Iwashita, K., 等人：“肾脏中丝氨酸蛋白酶抑制剂抑制前列腺素分泌。”J.Am.Soc.Nephrol.. 14. 11-16 (2002)

Ikebe, M., et al.: "Up-regulation of the secretory -type Na/K/2Cl cotransporter in the kidney by metabolic acidosis and dehydration in tats"J.Am.Soc.Nephrol.. 12. 423-430 (2001)

Ikebe, M., 等人：“代谢性酸中毒和脱水对肾脏中分泌型 Na/K/2Cl 协同转运蛋白的上调”J.Am.Soc.Nephrol.. 12. 423-430 (

Adachi M.: "Activation of epithelial sodium channels by prostasin in Xenopus Oocytes"J. Am. Soc. Nephrol.. 12. 1114-1121 (2001)

Adachi M.：“爪蟾卵母细胞中前列腺素激活上皮钠通道”J。