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新しいGTP結合蛋白(G_<13>)をかいしたイオンチャネル活性機序の解明

使用新的 GTP 结合蛋白 (G_<13>) 阐明离子通道激活机制

基本信息

批准号：
09877220
负责人：
冨田公夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877220/
关键词：
Gたんぱく Clチャネルパッチクランプ

项目摘要

三量体GTP結合蛋白質のGa_<12>familyに属するGa_<13>のeffecter systemは未だ不明である。G proteinはadenylate cyclaseやphospholipase Cなどの酵素と共にKチャネルやCaチャネルをregulateすることが知られている。今回私達はGa_<13>のイオンチャネルに対する効果を検討した。Ga_<13>とcoupleすることが知られているthrombinをリガンドとして用いてCOS-7細胞でthrombinにより誘導される電流をパッチクランプ法により測定した。Nystatin法によるvoltage clampにおいて、bath solution中のthrombin(1u/ml)により誘導されるCl電流が観察された。EGTA 10mMを添加したCa-freeの電極内液を用いたwhole cell法においても同様な電流が観察され、細胞内Caにindependentな現象と考えられた。この電流のI-V relationshipは-76mVから+24mVの範囲ではほぼohmicで、このCl電流はindomethacin(1mM)により抑制されたが、SITS(2mM)では変化はみられなかった。whole cell法において、電極内液に抗Ga_<13>抗体を加え、Cl電流への効果を観察した。wholw cell作成30分後、thrombin灌流によるCl電流の誘導は認められなかった。これらのことより、Thrombin receptorはGa_<13>の活性化を介してCa independentにClチャネルを活性化していることが明らかになった。さらにGa_<13>が直接このチャネルを活性化している可能性についてinside-out patchにて検討中である。

Trisomy GTP binding protein Ga_<12>family belongs to unknown Ga _ & lt;13> effecter system. G protein, adenylate cyclase, phospholipase C, enzyme, enzyme, Ca, regulate, enzyme, enzyme. This time, I secretly signed up to Ga_<13>. I didn't know how to do it. The Ga_<13> couple equipment is responsible for the determination of the temperature by using the COS-7 cell thrombin sensor to determine the temperature of the current current. Nystatin method is used to detect voltage clamp emissions, and thrombin (1u/ml) filters in bath solution are used to direct Cl current monitoring. The addition of EGTA 10mM to Ca-free cathode liquid chromatography was performed by whole cell method. The same current current chromatography was performed, and the intracellular Ca emission independent was detected. In the range of ohmic V relationship-76mV + 24mV, ohmic, Cl indomethacin (1mM), SITS (2mM) and SITS (2mM) are used to suppress the performance of the system. Whole cell assay, anti-Ga_<13> antibody assay and Cl current assay were used to detect the results. After the wholw cell score is 30 minutes, thrombin will infuse the Cl current generator to monitor the temperature response. Please tell me that the Thrombin receptor Ga _ & lt;13> is active, and that you can activate the Ca independent, Cl, activate, and activate. The possibility of activation, the possibility, the possibility, the