生体内での測定を目指した簡便な一酸化窒素(NO)測定技術の開発

开发用于体内测量的简单一氧化氮 (NO) 测量技术

• 批准号: 13877401
• 负责人: 松島 明美
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877401/
• 关键词: 一酸化窒素(NO); 吸収スペクトル; 電子スピン共鳴(ESR)

一酸化窒素(NO)は不安定なフリーラジカルであり、生体内での挙動を正確に捕らえることが困難であったことが、NOの生理学的、あるいは病理学的役割を長いあいだ解明できなかった一因である。このようなNOの特性をふまえて、生体維持機構におけるNOの位置付けを明確にするためには、NOを正確に、しかも簡便に測定する技術の開発が必要不可欠である。私達は、吸収スペクトルの測定というきわめて簡便な方法(吸収法)によってNOの測定が可能であることを発見し、この測定技術の確立と臨床応用を目指して研究を進めている。現在、NOの産生を直接測定するためには、PTIOを代表とするNOの選択的消去剤が利用されている。すなわち、PTIOはNOとの反応によりPTIを生成するが、産生されたPTIの量を指標としてNOの定量が行われる。しかしながら、これまでPTIの検出には電子スピン共鳴(ESR)スペクトルの測定が用いられてきたため、広く一般に実施可能な測定法であるとは言い難い。私達は、PTIOからPTIへの生成に伴い、560nmにおける吸光度の減少と、420nmにおける吸光度の上昇が起こることを発見し、この現象を利用して簡便なNO測定法の開発に取り組んでいる。昨年度は、このような420nmにおける吸光度の上昇が、実際にPTIOからPTIへの変換に基づくことを従来から用いられてきたESRスペクトルの測定との比較によって確認した。続く本年度は、細胞培養系でNOのリアルタイムな測定系の確立を試みた。すなわち、NOの選択的消去剤であるPTIOをNO産生細胞(活性化マクロファージ)の培養系に直接加えて、培養液中に産生されるNOを吸収法により、リアルタイムでモニターする系を試みた。現時点では、細胞毒性の低減が課題となり、実現には至っていないが、緩衝液の変更により克服可能と考え、培養条件の改良を試みている。

One acid element (NO) is unstable, the movement in vivo is difficult to capture correctly, the physiology of NO is difficult, and the pathology is difficult. It is necessary to develop a technology for determining NO accurately and simply by analyzing the characteristics of NO and the position of NO in the biological maintenance mechanism. A simple and convenient method for determination of NO by absorption method was developed, and the determination technique was established. Now, NO production is directly measured, PTIO represents NO selective elimination and utilization. PTIO NO NO NO The measurement of PTI in the presence of electron resonance (ESR) is generally difficult. The formation of PTIO and PTI was accompanied by a decrease in absorbance at 560nm and an increase in absorbance at 420nm. The increase in absorbance at 420nm was confirmed by comparison with the change in PTIO. This year, we tried to establish a NO assay system for cell culture systems. The culture system of NO-producing cells (activated cells) was tested by direct addition of NO and NO production in culture medium by adsorption method. The present study is aimed at reducing cytotoxicity and improving culture conditions.

项目成果

Matsushima, A., et al.: "Essential role of NF-кB-inducing kinase and IкB-kinase α in NF-кB activation through lymphotoxin-β receptor but not through TNF receptor-I"Journal of Experimental Medicine. 193(5). 631-636 (2001)

Matsushima, A. 等人：“NF-кB 诱导激酶和 IкB 激酶 α 在通过淋巴毒素-β 受体而非 TNF 受体-I 激活 NF-кB 中的重要作用”实验医学杂志 193(5)。 ）631-636（2001）。