DT40細胞と酵母を用いた放射線誘発ゲノム不安定性の研究

使用 DT40 细胞和酵母研究辐射诱导的基因组不稳定性

• 批准号: 13878103
• 负责人: 丹羽 太貫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13878103/
• 关键词: DT40; Rad54; Ku70; 酵母; Ade2; ミトコンドリア不安定性; 2次元電気泳動; 放射線; ゲノム不安定性; 遅延突然変異; ミニサテライト; Rad54ノックアウト細胞; Ku70ノックアウト細胞

DT40細胞より分離したDNAについてマウスミニサテライト配列Pc-1をプローブにしてSouthem解析を行ったところ、強くhybridizadonするバンドが見つかった。これをクローニングして配列を解析したところ、Pc-1にみられる反復配列であるGGGCAを繰り返し配列としてもつ部位と、これと1塩基異なる配列AGGCAの繰り返し部位からなるミニサテライト配列であることが明かになった。このニワトリDT40配列を指標にして放射線照射による突然変異誘発解析を行った。その結果、野生型DT40細胞では、照射により突然変異頻度が上昇することが明かになった。この突然変異生成にどの遺伝子が関与しているかを明かにする目的で、京都大学医学部武田俊一教授よりKu70欠損、Rad54欠損、Ku70/Rad54 2重欠損を分与いただいた。これらについて解析した結果、Rad54欠損株では放射線によるミニサテライト配列の突然変異が生じないことが示され、組換えの機構によりこの変異が生じることが示された。酵母を用いた研究では、Ade2変異体を用いた。この変異体において、Ade2以外のAde関連遺伝子に突然変異が生じると、白色の細胞となる。そのため赤色のコロニーの中に白色のスポットをもつvariegatedコロニーではこの突然変異が遅延的に生じている可能性がある。X線を照射すると、遅延突然変異は相当の高頻度で生じることが明かになった。この遅延突然変異を示すクローンを分離して、様々な指標について解析したところ、遅延突然変異で生じた白色細胞ではAde関連遺伝子の突然変異ではなく、ミトコンドリアが脱落しているためであることが明かになった。すなわち、ミトコンドリアの不安定を見ていることになる。この不安定性を示す株について、広島の放射緑影響研究所で開発された2次元電気泳動注をもちいたゲノム解析を行ったところ、ゲノムの一部に突然変異を持つことが明らかになった。

DT40 cell separation DNA sequence Pc-1 sequence Southem analysis sequence For example, if the Pc-1 is in the same position, the GGGCA is in the same position. If the Pc-1 is in the same position, the GGGCA is in the same position. The D40 is arranged in the same direction as the radiation exposure. As a result, wild-type DT40 cells were exposed to radiation with a sudden increase in frequency. This sudden change in the generation of genetic information is related to the purpose of the study, Professor Takeda Shunichi, Faculty of Medicine, Kyoto University, Ku70 loss, Rad54 loss, Ku70/Rad54 2 double loss, and the middle. The analysis results show that Rad54 is deficient in radiation, and the sudden change of arrangement is caused by the change of mechanism. Yeast is used in the study. The Ade related genes other than Ade2 suddenly change. The possibility of a sudden change in the color of the red and white X-ray irradiation is very frequent. The sudden change of the index indicates that the white cells are separated from the white cells and the white cells are separated from the white cells. The security of the premises is not stable. The instability of this kind is demonstrated by the development of two-dimensional electrokinetic analysis in the Institute of Radiation and Green Effects.

项目成果

丹羽太貫: "p53 dependent S phase damage checkpoint and pronuclear crosstalk in mouse zygotes with X-irradiated sperm"Mol. Cell. Biol.. 22. 2220-2228 (2002)

Taiki Niwa：“受 X 射线照射的精子中 p53 依赖性 S 期损伤检查点和原核串扰”Mol. Cell. 22. 2220-2228 (2002)

丹羽太貫: "Novel surveilance of the 53-depenent S checkpoint ensures chromosome damage repair and development of mouse embryos fertilized with X-irradiated sperm"Radiat. Res.. 158. 735-742 (2002)

Taiki Niwa：“53 依赖性 S 检查点的新颖监视确保了 X 射线辐射精子受精的小鼠胚胎的染色体损伤修复和发育”Res.. 158. 735-742 (2002)

丹羽太貫: "Mapping of genetic modifiers of thymic lymphoma development in p53-knockout mice"Oncogene. 22. 1098-1102 (2003)

Taiki Niwa：“p53 敲除小鼠胸腺淋巴瘤发展的遗传修饰物的图谱”Oncogene 22. 1098-1102 (2003)。

Shimura K, Niwa O et al.: "p53 dependent S phase damage checkpoint and pronuclear crosstalk in mouse zygotes with X-irradiated sperm"Molecular and Cellular Biology. 22. 2220-2228 (2002)

Shimura K、Niwa O 等人：“受 X 射线照射的精子的小鼠受精卵中 p53 依赖性 S 期损伤检查点和原核串扰”分子和细胞生物学。

Ohtaki M, Niwa O: "A mathematical model for radiation carcinogenesis with induction of genomic instability and cell death"Radiation Research. 56. 627-677 (2002)

Ohtaki M、Niwa O：“诱导基因组不稳定和细胞死亡的辐射致癌数学模型”辐射研究。