マウス初期胚特異的転写抑制因子ELPの機能と発現制御機構の解析

小鼠早期胚胎特异性转录抑制子ELP的功能及表达调控机制分析

• 批准号: 05273215
• 负责人: 丹羽 太貫
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05273215/
• 关键词: EC細胞; Mo-MuLV; ELP; RAR; TR; 核内受容体; differential splicing; multiple promoter

マウス未分化テラトカルシノーマ細胞(以下、EC細胞と略す。)におけるモロニー白血病ウイルス(Mo-MuLV)の転写抑制因子ELPについて解析し、以下の結果を得た。ELP結合配列であるTCAAGGTCAは、核内受容体結合配列にあるAGGTCAを含む。Mo-MuLV LTRにみられる2ヵ所のELP結合部位は、それぞれRARとTRの結合部位でもある。これよりELPは、核内受容体に競合することで転写抑制をすると思われる。それゆえ、TCAAGGTCA配列をもとにRARが結合し得ない、あるいはし得る複数の標的配列を合成し、これについてCAT assayを行ったところ、RARの標的になり得ないELP結合配列は転写抑制されない一方で、RARが結合可能なものはELPにより転写抑制を受けることが示された。このように、ELPによる転写抑制の一つの機構には、核内受容体に対する競合があるものと思われる。ELP遺伝子のゲノムの解析については、まずEC細胞のcDNA libraryを検索したところ、ELP遺伝子には4種類のisoformの存在が明らかになった。genome配列を分離し、これに4種類のcDNAと対応させた。その結果、ELPは8つのexonよりなり、転写はexon1,2,3から開始される。遺伝子のプロモーター領域はCAT assayよりexon1の上流とintron1にそれぞれあることが明らかになった。intron2にはプロモーター活性がない。3つの転写開始点と、exon6とexon8にある2つの転写終結点の組み合わせにより、上記の4種類のmRNAができる。これらのmRNAは、N末端の長短とC末端の転写活性化部位の有無で異なる3種類の蛋白をコードする。CAT assayでしらべたところ、これら3種類の蛋白は転写活性化部位の有無により、それぞれ転写活性化因子および抑制因子として機能することが明らかになった。

Youdaoplaceholder0 ウス undifferentiated テラトカ テラトカ シノ シノ ウス ウス ウス cells (hereinafter, EC cells と omitted す.) に お け る モ ロ ニ ー leukemia ウ イ ル ス (Mo - MuLV) の planning write inhibitory factor ELP に つ い て analytical し, the result of the following の を た. ELP binding coordination であるTCAAGGTCA, endonuclear acceptor binding coordination にあるAGGTCAを contains む. Mo-MuLV LTRにみられる2ヵ <s:1> ELP binding site ヵ それぞれ それぞれRARとTR <s:1> binding site で ある ある ある. <s:1> れよ に ELP われる and nuclear acceptor に compete and cooperate すると で転 write inhibition をすると think われる. そ れ ゆ え, TCAAGGTCA match column を も と に RAR が combining し have な い, あ る い は し have る plural の mark with column を synthetic し, こ れ に つ い て CAT Assay を line っ た と こ ろ, RAR の mark に な り have な い ELP combined with column は planning write inhibit さ れ な い で, RAR が combination may な も の は ELP に よ り planning write inhibit を by け る こ と が shown さ れ た. <s:1> ように, ELPによる転 write inhibitory stay-<s:1> mechanism に われる, nuclear acceptor に against する competition and cooperation がある <s:1> と と think われる. ELP posthumous son 伝 の ゲ ノ ム の parsing に つ い て は, ま ず EC cells の cDNA library を 検 cable し た と こ ろ, ELP but 伝 に は 4 kinds の isoform の is が Ming ら か に な っ た. genome coordinates を to isolate <s:1> and れに れに four types of cDNAと pairs 応させた. Youdaoplaceholder0 そ result, ELP よ 8 よ <s:1> exonよ よ な 転 転 write そ exon1,2,3 ら ら start される. Posthumous son 伝 の プ ロ モ ー タ ー field は CAT assay よ り exon1 の upper と intron1 に そ れ ぞ れ あ る こ と が Ming ら か に な っ た. intron2に プロモ プロモ タ タ activity がな がな. 3 つ の planning write と to the starting point, exon6 と exon8 に あ る 2 つ の planning write endpoints の group み close わ せ に よ り, written の 4 kinds の mRNA が で き る. <s:1> れら <s:1> mRNA, length of n-terminal <s:1> と length of c-terminal <e:1> 転 writing the activated site <e:1>, presence or presence of で difference なる three types of <s:1> proteins をコ ドする ドする ドする. CAT assay で し ら べ た と こ ろ, こ れ ら 3 kinds の protein は planning write activeness site の presence に よ り, そ れ ぞ れ planning write activation factor お よ び inhibitory factor と し て function す る こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

Morohashi,K.,Niwa,O.,et al.: "Steroidogenic cell-specific distribution and transcriptional activities of Ad4BP and ELP." Molecular Endocrinology. (in press).

Morohashi,K.,Niwa,O.,et al.：“Ad4BP 和 ELP 的类固醇生成细胞特异性分布和转录活性。”

Numoto,M.,Niwa,O.,et al.: "Transcriptional repressor ZF5 identifies a new conserved domain in zinc finger proteins." Nucleic Acids Research. 21. 3767-3775 (1993)

Numoto,M.,Niwa,O.,et al.：“转录抑制因子 ZF5 识别出锌指蛋白中的一个新的保守结构域。”