和漢処方処置による脳内遺伝子発現変化に関する基礎的研究

日本和中国处方治疗引起的大脑基因表达变化的基础研究

• 批准号: 15659157
• 负责人: 東田 道久
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659157/
• 关键词: 和漢処方薬; 釣藤散; 脳虚血; DNAマイクロアレイ; PT; PCR; アルツハイマー; 補中益気湯; 大脳皮質初代培養細胞; マイクロアレイ; 両側総頸動脈永久結紮; 痴呆; 遺伝子発現; RT; 慢性虚血; 睡眠増強

「和漢薬の作用機序には遺伝子発現の量的変化が関連する」との仮説のもとに、長期投与を要する和漢薬には、病態により変化している遺伝子発現量を元に戻す作用があるものと考え、本研究を行なった。昨年までは、脳虚血・痴呆のモデル動物である両側総頚動脈永久結紮ラットの脳中で発現変化する遺伝子をマイクロアレイ法により検討し、虚血による変化を釣藤散が回復させる数多くの因子を見出した。その中にはアルツハイマー病に関連する因子が多く含まれていたので、アレイにより見つかった因子に加え、その他のアルツハイマー関連因子の脳虚血/釣藤散処置による変化を検討した。その結果、アルツハイマー病源因子とされるアミロイド前駆蛋白(APP)およびその分解にかかわる因子Neprilysin、インスリン分解酵素(IDE)はいずれも虚血4日後をピークとする発現量の増大を示した。釣藤散はIDEの発現上昇を抑制したが、その他の因子の発現量には影響を及ぼさなかった。アミロイドは長期間に渡る蓄積によってアルツハイマー病を引き起こすとされているが、この様に虚血初期においてそのmRNAの発現上昇を引き起こすことは、病態下において何らかの機能的役割を演じている可能性が考えられる。そこで、APP、IDE、NeprilysinのSiRNAを作製し、ラット大脳皮質初代培養細胞の培養開始2日後に添加することにより、それらのmRNA発現を抑制した。その発現抑制をRT/PCR法により確認するとともに、細胞形態変化に及ぼす影響について検討し、APP mRNA発現抑制は、細胞の活力低下、神経突起伸展の遅延を引き起こしている可能性を見出した。また、本研究課題により、補中益気湯の神経培養細胞遺伝子発現に及ぼす効果についてもマイクロアレイ法により検討し、発現上昇する因子232種と、減少する因子83種を見出した。

"The mechanism of action of Chinese medicine is related to the change of the amount of gene expression," this study is carried out in the following ways: In the past year, a number of factors have been identified in the detection and recovery of Alzheimer's disease in animals with dementia. In addition, there are many factors related to the disease, such as the increase in the number of factors related to the disease, the increase in the number of factors related to the disease, and the decrease in the number of factors related to the disease. As a result, the pathogenic factors such as Neprilysin (APP), Neprilysin (IDE) and Neprilysin (IDE) increased after 4 days. The increase of IDE occurrence was inhibited, and the occurrence of other factors was affected. The expression of mRNA in the early stage of the disease is increasing. SiRNAs for APP, IDE and Neprilysin were controlled and mRNA expression was inhibited when added 2 days after the start of culture of primary cortical cells. RT/PCR method was used to confirm the inhibition of APP mRNA expression, cell morphological changes and effects, and to reveal the possibility of inhibition of APP mRNA expression, cell viability reduction, and delayed extension of neurosome. In this study, 232 factors and 83 factors were found to increase and decrease gene expression in cultured cells of the brain.

项目成果

RNA editing and short variant of serotonin 2C receptor in neuronal differentiated NG108-15 cells.

神经元分化的 NG108-15 细胞中 5-羟色胺 2C 受体的 RNA 编辑和短变体。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J. Pharm. Sci. 96
• 作者: Tohda M.;Watanabe H.;Tohda M. et al.;Tohda M. et al.
• 通讯作者: Tohda M. et al.

Molecular cloning and characterization of a novel sequence, Vof-16, enhanced the expression in permanet ischemic rat brain.

新序列 Vof-16 的分子克隆和表征增强了永久缺血大鼠脑中的表达。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biol. Pharm. Bull. 27
• 作者: Tohda M.;Watanabe H.
• 通讯作者: Watanabe H.

Tohda M., Watanabe H.: "Determination method of sense sequence based on RT/PCR."Journal of Biochemical & Biophysical Methods. 55. 101-105 (2003)

Tohda M.，Watanabe H.：“基于 RT/PCR 的有义序列测定方法。”生物化学杂志

Choto-san's effects on the mRNA expression of Alzheimer's disease related factors in the permanent ischemic rat brain.

Choto-san 对永久性缺血大鼠大脑中阿尔茨海默病相关因子 mRNA 表达的影响。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biol. Pharm. Bull. 28(in press)
• 作者: Umetsu K;Tanaka M;Yuasa I;Adachi N;Miyoshi A;Kashimura S;Park K-S;Wei Y-H;Watanabe G;Osawa M;Hayashi H. et al.
• 通讯作者: Hayashi H. et al.

Watanabe H. et al.: "Pharmacological evidence for antidementia effect of Choto-san (Gouteng-san), a traditional Kampo medicine."Pharmacology Biochemistry & Behavior. 75. 635-643 (2003)

Watanabe H. 等人：“传统汉方药物 Choto-san (Gouteng-san) 抗痴呆作用的药理学证据。”药理学生物化学