ニューロンに特異的なグアニル酸シクラーゼ共役型セロトニン受容体の同定と機能の解明

神经元特异性鸟苷酸环化酶偶联血清素受体的鉴定和功能阐明

• 批准号: 05858112
• 负责人: 東田 道久
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05858112/
• 关键词: セロトニン; グアニル酸シクラーゼ; ニューロン; プロテインキナーゼC; クローニング

NG108-15細胞中にグアニル酸シクラーゼ(GC)を活性化する新規サブタイプのセロトニン(5-HT)受容体(5-HT_G)が存在することを見いだし、これまでにその性質についての解析を行って、一酸化窒素生成系は関与しないことや、細胞外へのcGMPの放出が認められることなどの数多くの知見から、無傷細胞においてはその活性化機構は心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)受容体と類似していることを報告してきた。今回さらに、その作用機序の詳細な検討を行い、(1)細胞膜画分をANPで刺激するとMg^<2+>とATPに依存してGCの活性化が生ずるものの、5-HTによってはほとんど活性化を生じなかったこと、(2)プロテインキナーゼCの活性化は、無傷細胞における5-HTによるGC活性化を完全に抑制したが、ANPによるものはあまり抑制しなかったこと、(3)5-HT_GはニューロブラストーマN18TG-2中に多く存在するが、グリオーマC6Bu-1中にはほとんど存在しないことを明らかにした。これらの結果により、5-HT_G受容体は、ANP/GCのような受容体/活性部位一体型の蛋白ではなく、GCとは別個の蛋白質であること、および5-HT_Gはニューロンに選択的に存在し、その機能を担っている可能性があると推定した。また、N18TG-2のmRNAからcDNAを調製し、COS-7発現系を用い、cGMPの生成量を定量する新たな機能的発現法によるクローニングも試み、現在まで2,000クローンに絞り込んでおり、近い将来その一次構造を明らかに出来るものと考えている。

NG108-15 cell line is a new cell line for the activation of 5-HT receptor (5-HT_G), and the existence of 5-HT receptor (5-HT_G) in the cell line. The activation mechanism of non-injured cells is atrial receptor (ANP). (1) The activation of GC is dependent on ATP, 5-HT,(2) The activation of GC is completely inhibited by 5-HT,(3) The activation of GC is completely inhibited by 5-HT,(4) The activation of GC is completely inhibited by 5-HT.(3)5-HT_G 5-HT_G receptor, ANP/GC receptor/active site integral-type protein, GC receptor/active site integral-type protein A novel method for the detection of N18TG-2 mRNA, cDNA, COS-7 expression system, and cGMP production was developed.

项目成果

Tohda,Michihisa: "Distinct induction of c-fos mRNA in NG108-15 cells transfected m1 and m3 muscarinic receptors." Eur.J.Pharmacol.Mol.Pharmacol.Sec.(in press.).

Tohda，Michihisa：“转染 m1 和 m3 毒蕈碱受体的 NG108-15 细胞中 c-fos mRNA 的明显诱导。”

東田道久: "黄〓関連フラボノイドの中枢作用とその作用機構." 和漢医薬学会誌. (印刷中).

Michihisa Higashida：“黄色相关类黄酮的中枢作用和作用机制。”日本和中国药学会杂志（出版中）。

Urushihara,Hisashi: "Seiective potentiation of N-methyl-D-aspartate-induced current by protein kinase C in Xenopus oocytes injected with rat brain RNA." J.Biol.Chem.267. 11697-11700 (1992)

Urushihara，Hisashi：“注射大鼠脑 RNA 的爪蟾卵母细胞中蛋白激酶 C 选择性增强 N-甲基-D-天冬氨酸诱导的电流。”

Tohda,Michihisa: "Involvement of low molecular GTP binding proteins ADP-ribosylated by botulium toxin on 5-HTIC receptor-induced polyphosphoinositide turnover." Eur.J.Pharmacol.Mol.Pharmacol.Sec.266. 19-24 (1994)

Tohda, Michihisa：“肉毒杆菌毒素 ADP 核糖基化的低分子 GTP 结合蛋白参与 5-HTIC 受体诱导的多磷酸肌醇周转。”

Kumagai-Tohda,Chihiro: "Increase in neurite formation and acetylcholine release by transfection of GAP-43 cDNA into NG108-15 cells." J.Neurochem.61. 526-532 (1993)

Kumagai-Tohda，Chihiro：“通过将 GAP-43 cDNA 转染至 NG108-15 细胞，增加神经突形成和乙酰胆碱释放。”