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内因性の学習障害誘発因子の単離同定とその生理機能・発現制御機構の解明

内源性学习障碍诱发因素的分离和鉴定及其生理功能和表达控制机制的阐明

基本信息

批准号：
10771285
负责人：
東田道久
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Toyama Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

学習障害モデル動物として確立しつつある両側総頚動脈永久結紮(2VO)ラットの結紮にともなって脳内で生ずる分子的変化を遺伝学的手法を用いて検討した。今年度は、学習障害の原因因子の検索を目的として、結紮初期(4日後)に発現変化する因子についてDifferential Display法(DD法)により検討を行ない、11個の因子を単離、その配列を決定した。また、DD法による単離に際して、その後の操作を行いやすくするための独自の改良を加えた。得られた11種の因子のsense鎖をRT/PCRに基づく独自の手法により決定した後、すべてについて定量的PCR法によりその発現量変化を、2VO処置郡と対照郡との間で詳細に検討した。その結果、vof-21と名付けた因子の発現量が2VO処置によって著しく増大することを見出した。DD法により単離したvof-21は415塩基であったが、DD法により明らかになる配列は通常部分配列であるため、その全長のクローニングを行なう目的で、5'-race、3'-race法を行なった。その結果、DD法の際のprimerとしてoligo(dT)構造をもつものを用いたため、3'側ではこれ以上の配列は得られなかったが、5'側の266塩基の新たな配列が明らかとなった。明らかにした計681塩基によってコードされる蛋白の配列はコンピューター解析の結果からも、データーべ一ス検索の結果からも得られなかったことから、vof-21は5'側にさらに配列を有する新規の因子と考えられた。一方、昨年明らかにしたvof-16(DD法により789塩基を解明)の全長についての検討も行なったが、こちらは両race法により配列が得られなかった。このことなどよりvof-16の全長はかなり長いものと考え、現在ファージライブラリーにより全長の解析を進めている。今後、vof-16及びvof-21の全長の解析、ノーザンブロット解析を進めるとともに、その機能についてliposomeによるアンチセンス導入法を用いて検討する予定である。

The study of animal damage and the establishment of a permanent ligation of the aorta (2VO) are discussed in detail. This year, the study of the cause of learning impairment factors to explore the purpose, early ligation (4 days later), the emergence of factors in the Differential Display method (DD method) to explore the study, 11 factors to determine the separation, and other arrangements. In addition to the above, the following operations are performed independently. 11 factors were detected by RT/PCR, and the results were analyzed in detail. The result, vof-21 and the occurrence of the name factor are shown in the table below. DD method is divided into two parts: 1) the first part is divided into two parts: 1) the second part is divided into two parts: the third part is divided into three parts: the fourth part is divided into four parts: the fourth part is divided into three parts: the fourth part is divided into four parts: the fourth part is As a result, the DD method and the primer at the time of oligo(dT) structure are used in the middle, 3'side and above, and the 5' side are used in the middle, 5'side and 266' side. The results of the analysis of the protein sequence were as follows: A party, yesterday's Ming Dynasty, the vof-16(DD method, 789 base, solution) and the length of the discussion, the race method, the match, the match. The length of this article is divided into three parts: In the future, the length analysis of the vof-16 and vof-21, the analysis of the function of the vof-16 and vof-21, and the introduction of the function of the vof-16 and vof-21 will be discussed.