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肝インスリンシグナルの個体糖脂質代謝における役割-ノックダウン法を用いての解析-

肝脏胰岛素信号在个体糖脂代谢中的作用 - 使用敲除法进行分析 -

基本信息

批准号：
15659214
负责人：
片桐秀樹
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659214/
关键词：
RNA干渉肝細胞ノックダウン法

项目摘要

最近、植物や線虫等で見出されていたRNA interferenceと呼ばれる現象が哺乳類細胞でも確認され、特異的に蛋白の発現を抑制する手法として、注目されつつある。目的の蛋白のmRNA配列の一部(20塩基前後)に匹敵する2本鎖RNA (siRNA)を細胞内に導入することで、その蛋白の発現をほぼ完全に抑制することができるというものである。そこで、この技術を用いて、肝細胞におけるインスリンシグナルの抑制が、個体全身における糖代謝の恒常性維持にどのような役割を果たしているか、解明することを目的として、以下の実験を行った。adenovirusにこのsiRNAを発現するカセットを組み込み、マウスに静注することで肝臓におけるインスリン受容体の発現を抑制することにより、急性に肝臓のインスリンシグナルが減弱した場合、全身の糖代謝にどのような影響を及ぼすか検討した。が、そこで、効果的に遺伝子発現抑制を起こすsiRNAベクターの開発を試みた。昨年、10種類のベクターを作製し、その中で最も強力に抑制するベクターを選択した。本年は、これを実際にマウス個体に投与したところ、肝におけるインスリン受容体の発現は有意に抑制され、約1週間で肝臓の重量は著明に縮小を示した。血中インスリン濃度は約2倍に上昇し、肝におけるインスリンシグナルの低下に代償的に増加したものと考えられた。一方、空腹時血糖値は有意差を認めず、経静脈的糖負荷後の血糖曲線も、変化を認めなかった。これらより、肝におけるインスリン受容体シグナルの突然の遮断が生じ、肝重量の低下を招いても、糖代謝は、インスリン分泌の亢進により代償しうることが示された。

Recently, plant and nematode insects have been found to have RNA interference and expression inhibition in mammalian cells, and specific protein expression methods have been identified and noticed. A part of the mRNA alignment of the target protein (before and after the 20th base) is matched with the expression of the target protein. For example, if the liver cells are isolated, the glucose metabolism of the whole body will be maintained. Adenovirus siRNAs are produced by intravenous injection, inhibition of receptor production, attenuation of acute hepatic siRNAs, and effects on systemic glucose metabolism. The gene expression inhibition of siRNA is an important factor in the development of siRNA. Last year, 10 kinds of objects were controlled, and the most powerful objects were selected. This year, the weight of the liver was reduced significantly. The blood concentration increased by about 2 times, and the blood concentration decreased by about 2 times. One side, fasting blood glucose value is intentionally different, venous glucose load after the blood glucose curve is changed, change is recognized. The liver function is to compensate for the sudden interruption of the receptor system, the decrease of liver weight, the increase of glucose metabolism, and the secretion of protein.