リボザイムライブラリーを使用したヒトGH遺伝子LCR関連蛋白の同定とその機能解析

利用核酶文库鉴定人GH基因LCR相关蛋白及其功能分析

• 批准号: 15659221
• 负责人: 千原 和夫
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659221/
• 关键词: 成長ホルモン; 下垂体; locus control region; 遺伝子クローニング; リボザイムライブラリー; RNAiライブラリー; iRNAライブラリー

GH遺伝子の上流約14.5kbにGH遺伝子発現を規定するlocus control region (LCR)があり、このLCRが生理的なGH発現を調節する重要な領域であることが最近明らかとなってきた。このLCRに作用して、機能を制御するタンパクを同定することを目的に次の実験を行なった。ヒトGHLCRの下流にGH遺伝子プロモーター、さらにその下流にGFPcDNAを結合した発現ベクターを構築した。この順番が保たれるよう、このベクターを直線化し、GH3細胞(下垂体GH、PRL産生細胞)にトランスフェクションしGFPが産生されることを確認した。一方、Cos細胞(線維芽細胞、コントロールとして使用)にトランスフェクションしたところ、GFPの産生は認められなかった。組み込まれたゲノム領域の外来性遺伝子発現に及ぼす影響は、LCRがあると出現しにくいことが報告されており、このGFP陽性細胞では、ゲノムに組み込まれた外来遺伝子由来のGH遺伝子LCRとプロモーターによってGFP発現がおこっていることが期待される。

GH gene upstream about 14.5 kb GH gene expression regulation locus control region (LCR) is an important area for regulation of GH gene expression in physiology. The LCR function is controlled by the target. GHLCR downstream GH cDNA library, today's downstream GFP cDNA library The sequence of these changes was confirmed by the linearization of GH3 cells (pituitary GH and PRL producing cells). One side, Cos cells (linear bud cells, cells), GFP production and use. The expression of foreign genes and their effects on LCR and GFP positive cells were reported.

项目成果

Murata M: "A study of carotid intima-media thickness in GH-deficient Japanese adults during onset among adults and children"Euro J Endocrinol. 148. 333-338 (2003)

Murata M：“关于成人和儿童 GH 缺乏的日本成人发病期间颈动脉内膜中层厚度的研究”Euro J Endocrinol。

Iida K: "Diverse regulation of full-length and truncated growth hormone receptor expression in 3T3-L1 adipocytes."Mol Cell Endocrinol.. 210. 21-29 (2003)

Iida K：“3T3-L1 脂肪细胞中全长和截短生长激素受体表达的多样化调节。”Mol Cell Endocrinol.. 210. 21-29 (2003)

Kishimoto M: "Cloning and characterization of the 5'-flanklng region of the human ghrelin gene."Biochemical and Biophysical Research Communications. 305. 186-192 (2003)

Kishimoto M：“人类生长素释放肽基因 5-侧翼区域的克隆和表征。”生物化学和生物物理研究通讯。

Kishimoto M: "Mutant form of Pit-1 (R271W) does not act as a dominant inhibitor of Pit-1 action to activate the promoters of growth hormone and prolactin genes"Euro J Endocrinol. 148. 619-625 (2003)

Kishimoto M：“Pit-1 (R271W) 的突变形式不会作为 Pit-1 作用的显性抑制剂来激活生长激素和催乳素基因的启动子”Euro J Endocrinol。

Yoshioka S: "Up-regulation of mitochondrial transcription factor1 mRNA levels by GH in VSMC"Life Sci. 74. 97-109 (2004)

Yoshioka S：“VSMC 中 GH 上调线粒体转录因子 1 mRNA 水平”生命科学。