抗L型電位依存性カルシウムチャネル抗体測定系の確立 -自己免疫性神経・内分泌疾患における抗カルシウムチャネル抗体の意義-

抗L型电压门控钙通道抗体测定体系的建立 - 抗钙通道抗体在自身免疫性神经及内分泌疾病中的意义 -

• 批准号: 08877156
• 负责人: 千原 和夫
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877156/
• 关键词: カルシウムチャネル; 抗カルシウムチャネル抗体; 自己抗体; polyglandular autoimmune syndrome; ACTH単独欠損症

1.神経・内分泌細胞型α1およびβサブユニット-Glutathione S-transferase(GST)融合蛋白の産生既知の完全長の神経・内分泌細胞型α1サブユニットcDNAをpGEXに組み込み、α1サブユニットとGST蛋白の融合蛋白を発現するベクターを作製し、大腸菌DH5αをトランスフォームしたが、融合蛋白の発現を認めなかった。これは、α1サブユニットのcDNAが6Kbp以上と長大であること、膜貫通構造をとっており、疎水性が大であることによると考えられた。そこで、α1サブユニットのcDNAを数百から1Kbp程度のセグメントに分割し、GST融合蛋白質発現ベクターに組み込み融合蛋白の発現を試みた。さらに、カルシウムチャネルのβサブユニット(カルシウムチャネルの機能発現に重要なサブユニットであり、重症筋無力症ではβ1サブユニットに対する自己抗体が検出されるという報告がある)のβ1、β2、β3cDNA(約1.5-1.8Kbp)についてもGST融合蛋白質発現ベクターを作製した。α1サブユニットに関しては、十分量の蛋白産性が得られていないが、βサブユニットについては、発現が良好でGlutathione-Sepharoseアフィニティーカラムを用いて精製後、SDS電気泳動で確認した結果、目的とする蛋白が得られたことを確認した。現在、硫安沈殿、イオン交換クロマトグラフィーを併用して、さらなる精製度の向上と収量の増大をめざしている。2.抗VDCCα1サブユニット抗体測定ELISA系の確立上記の精製α1、βサブユニット蛋白が、まだ十分量得られていないため、ELISA系の確立はできていない。しかしながら、確立後直ちに測定に移れるよう、polyglandular autoimmune syndrome(PGS)、ACTH単独欠損症、IDDMやALS等の自己免疫的機序が発症に関与する可能性がある疾患の患者血清を採取、保存しつつある。

1. Shinshin · Endocrine cell type α1およびβサブユニット-Glutathione S - transferase (GST) fusion protein の produce both know の long の 経 god completely, endocrine cell type alpha 1 サ ブ ユ ニ ッ ト cDNA を pGEX に group み 込 み, alpha 1 サ ブ ユ ニ ッ ト と GST protein の fusion protein を 発 now す る ベ ク タ ー を as し, coliform DH5 alpha を ト ラ ン ス フ ォ ー ム し た が eggs and fusion Hakuba's を recognizes めな った. こ れ は, alpha 1 サ ブ ユ ニ ッ ト の cDNA が grew up more than 6 KBP と で あ る こ と, transmembrane structure を と っ て お り, big 疎 water-based が で あ る こ と に よ る と exam え ら れ た. そ こ で, alpha 1 サ ブ ユ ニ ッ ト の cDNA を hundreds of か ら 1 degree KBP の セ グ メ ン ト に し, GST fusion protein 発 now ベ ク タ ー に group み 込 み fusion protein の 発 を now try み た. さ ら に, カ ル シ ウ ム チ ャ ネ ル の beta サ ブ ユ ニ ッ ト (カ ル シ ウ ム チ ャ ネ ル の function 発 に now important な サ ブ ユ ニ ッ ト で あ り, severe muscle weakness disease で は beta 1 サ ブ ユ ニ ッ ト に す seaborne る their antibody が 検 out さ れ る と い う report が あ る) の beta 1, beta 2, beta 3 cdna (about 1.5 to 1.8 Kbp) に つ い て も The GST fusion protein is produced by ベ, タ, <s:1>, を and <s:1> た. Alpha 1 サ ブ ユ ニ ッ ト に masato し て は, ten component の protein to produce sexual が ら れ て い な い が, beta サ ブ ユ ニ ッ ト に つ い て は, good 発 now が で Glutathione - Sepharose ア フ ィ ニ テ ィ ー カ ラ ム を with い て refined after bathing, SDS electric 気 で confirm し た results, purpose と す る protein が must ら れ た こ と を Confirm that た. Now, sulfur AnShenDian, イ オ ン exchange ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を and し て, さ ら な る fine system の upward と の raised large amount of 収 を め ざ し て い る. 2. Resistance VDCC alpha 1 サ ブ ユ ニ ッ ト antibody determination of ELISA is の establish written の refined alpha 1, beta サ ブ ユ ニ ッ ト protein が, ま だ ten components have ら れ て い な い た め, ELISA is の establish は で き て い な い. <s:1> れるよう ながら, after establishment, direct ちに determination に shift れるよう, polyglandular autoimmune Serum を collection and preservation of <s:1>...... ある...... ある ある from patients with <s:1> diseases related to に and する possibility of がある pathogenesis of autoimmune diseases such as syndrome(PGS), ACTH単 deficiency disease, IDDMやALS.