权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

cell-trapping法を用いたES細胞からの下垂体細胞の分化単離

使用细胞捕获法从 ES 细胞中分化和分离垂体细胞

基本信息

批准号：
13877171
负责人：
千原和夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877171/
关键词：
下垂体 ES細胞細胞分化転写因子

项目摘要

本研究の目的は、下垂体の初期発生に関与すると想定される種々の転写因子をES細胞に発現させ、ES細胞が下垂体の方向に分化しないか検討することである。まず、下垂体の発生初期に出現する転写因子がES細胞の培養条件の変動によって如何に変化するかRT-PCRで調べた。ES細胞をembryoid bodyを形成させた後、あるいは形成させずに、LIF存在下、あるいは非存在下で培養を行ない、経時的にtotal RNAを抽出、これをもとににRT-PCRを行なった。下垂体形成の初期に出現するPtx-1,Ptx-2 mRNAは、いずれの条件でも出現した。Lhx-3 mRNAも出現する傾向にあった。さらに、培養期間を延長すると、驚いたことに成長ホルモン(GH) mRNAも出現した。この成績は、ES細胞が一様にGH産生細胞の方向に分化したわけでなく、一部のES細胞がGH産生細胞の方向に自発的に分化したため得られたものだと解釈している。実際に、GHmRNAを発現する細胞はどの程度あるのか、GH蛋白も産生されているのかについては、今後明らかにする必要がある。このような条件で培養したES細胞の一部は、すでに下垂体の方向にコミットメントされている可能性があり、このような細胞をさらに分化させることを計画している。すなわち、さらに多数の細胞をGH産生細胞の方向に分化させることを目的に、Ptx-1,Ptx-2,Lhx-3に引き続いて出現する転写因子であり、GH産生細胞の分化に重要なProp-1およびPit-1を強制的に発現させ、発現細胞の形質変化を調べる予定である。

The purpose of this study is to determine the expression of ES cells and the differentiation of ES cells in the early stages of pituitary development. RT-PCR was used to regulate the changes of culture conditions of ES cells due to the presence of transcription factors in the early stages of pendulous development. ES cells were cultured in the presence of LIF and total RNA was extracted. Ptx-1 and Ptx-2 mRNA are expressed in the early stages of hypophysis. Lhx-3 mRNA expression tends to increase. The growth of GH mRNA was observed during culture. The result is that ES cells differentiate in the direction of GH production, and some ES cells differentiate in the direction of GH production. In fact, the expression of GH mRNA in cells is not stable, GH protein production is not stable, and it is necessary in the future. The conditions for culture of ES cells are: 1) the orientation of the pituitary; 2) the possibility of differentiation of ES cells; and 3) the planning of differentiation of ES cells. In most cells, Ptx-1,Ptx-2,Lhx-3 are present in the direction of differentiation of GH-producing cells, and the presence of transcription factors, Prop-1 and Pit-1, which are important for the differentiation of GH-producing cells, are pre-determined for the development and qualitative transformation of developing cells.