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象牙芽細胞分化モニター法の開発とその応用

成牙本质细胞分化监测方法的建立及其应用

基本信息

批准号：
15659442
负责人：
二藤彰
金额：
$ 2.11万
依托单位：
National Institute of Radiological Sciences (2004)Tokyo Medical and Dental University (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659442/
关键词：
Dspp 相同組え換え Targeting 象牙芽細胞相同組み換え

项目摘要

前年度までの実験に引き続き、細胞株で相同組み換えを行うためのベクターの改変、targeting vectorの作成、およびgene targetingを行う際の遺伝子導入条件の検討を行った。knock-in vectorとなるプラスミドは、遺伝子発現マーカーとしてIRES-EGFP、選択マーカーとしてneomycinを用いた。さらにnegative selectionとしてHSV-TK遺伝子を置き、neomycin遺伝子はloxP siteではさんだ。前年度に単離したDspp遺伝子ゲノムを挿入し、そのコンストラクトを間葉系幹細胞C3H10T1/2細胞に遺伝子導入した。その際、ほぼ同じサイズの(15kb)コントロールプラスミドを用いて導入効率を検討した。さらに、ES細胞ではtargetingを行う配列によって相同組み換えの起こりやすさが異なることが知られているため、すでにES細胞においてgene targetingが行われた遺伝子に対するknock-in vectorプラスミドを作成し、それを相同組み換えのモニターのpositive controlとした。すなわちRecQL4遺伝子に対するknock-in vectorを用い、遺伝子導入後、選択培地で培養し、いくつかのクローンを回収した。それら選択クローンを増殖させ、DNAを回収し、knock-in vectorの挿入部位近傍の配列決定を行った。現時点までに、RecQL4遺伝子、Dspp遺伝子ともに目的とされる部位には挿入されていない。相同組み換え実験を細胞株で行うために必要な条件、すなわち、高い遺伝子導入効率、大量の選択クローンのスクリーニングである。おそらくES細胞に比べ組み換え効率は2桁近く低いことが予想されるため、この条件をクリアすべく更なる検討を行っている。

In the previous year, the same components of the cell line and the cell line were introduced. They were modified, targeting vector was made, and the gene targeting line was modified. The condition was introduced. The knock-in vector will need to know that the neomycin will not be used. If you want to use this, you will see that the neomycin will be used. "negative selection", "HSV-TK", "child", "neomycin", "loxP site", "child". In the previous year, the Dspp

项目成果

期刊论文数量（8）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Inhibitory helix-loop-helix transcription factors Id1/Id3 promote bone formation in vivo

DOI：
10.1002/jcb.20154
发表时间：
2004-10-01
期刊：
JOURNAL OF CELLULAR BIOCHEMISTRY
影响因子：
4
作者：
Maeda, Y;Tsuji, K;Noda, M
通讯作者：
Noda, M

Noggin inhibits chondrogenic but not osteogenic differentiation in mesodermal stem cell line C1 and skeletal cells.

DOI：
10.1210/en.2003-0685
发表时间：
2004-07
期刊：
Endocrinology
影响因子：
4.8
作者：
A. Nifuji;O. Kellermann;M. Noda
通讯作者：
A. Nifuji;O. Kellermann;M. Noda

Tob deficiency superenhances osteoblastic activity after ovariectomy to block estrogen deficiency-induced osteoporosis

DOI：
10.1073/pnas.0303093101
发表时间：
2004-04-27
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Usui, M;Yoshida, Y;Noda, M
通讯作者：
Noda, M

Spaciotemporal association and bone morphogenetic protein regulation of Sclerostin and Osterix expression during embryonic osteogenesis