新規発現プロフィール法を用いた骨格原基の細胞凝集形成に関わる新規遺伝子の単離

使用新的表达谱方法分离参与骨骼原基细胞聚集体形成的新基因

• 批准号: 18659546
• 负责人: 二藤 彰
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tsurumi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659546/
• 关键词: 遺伝子; 骨芽細胞; 骨格; 分化; 骨格組織; 網羅的遺伝子発現; 発生

本研究では、骨格原基において細胞凝集塊形成に関わる新規分子を単離することを目的とした。そのために新規高精度発現プロフィール法(HiCEP法)を応用し、in vivoの微量な細胞凝集塊組織における網羅的な遺伝子発現解析を行うアプローチを確立した。まず発現変動が認められる転写産物を網羅的にピックアップし、その上で転写産物の同定を行った。微量RNA(約10ng)をもとにHiCEP反応を行うため、従来のHiCEP反応を改良し、固相での酵素反応を行った。それにより約3万の転写産物のプロファイルを解析し、発現量に変化の認められた転写産物が約400種類得られた。それらの遺伝子の同定を行った。HiCEP反応後、変動パターンから選定した転写産物をゲルから抽出、PCR増幅した後、ダイレクトシークエンスによって配列決定した。目的とする転写産物についてデーターベースで相当するものが得られなかったものについては、両端に多数種類のspecificprimerを設計し、PCR増幅したのちそれぞれに対してシークエンスを行った。さらに、一部は転写産物をユニバーサルプライマーにてPCR増幅したものを、クローニングベクターにサブクローニングし、大腸菌のコロニーからダイレクトシークエンスを行って配列決定した。これらにより約300の遺伝子配列を同定した。また、それらが細胞凝集に伴って発現変動が認められるか確認するために、Embryonic cay11.5の肢芽を用いた細胞凝集再構成を行い、RNA抽出後real time PCRを行った。多くの遺伝子産物が凝集形成に伴って発現変動することを確認した。

This study で は, bone primordium に お い て cell agglutinate block form に masato わ る new rules on molecular を 単 from す る こ と を purpose と し た. そ の た め に new rules and high precision 発 now プ ロ フ ィ ー ル method (HiCEP method) を 応 し, the in vivo trace な の cell agglutinate tissue に お け る な of snare 伝 son 発 now line analytical を う ア プ ロ ー チ を establish し た. ま ず 発 now - move が recognize め ら れ る planning write product を snare に ピ ッ ク ア ッ プ し, そ の で on product planning write の with fixed line を っ た. Micro RNA (ng) about 10 を も と に HiCEP anti 応 を line う た め, 従 の HiCEP anti 応 を improved し, solid phase で の enzyme reverse 応 を line っ た. About 30000 の そ れ に よ り product planning write の プ ロ フ ァ イ ル を parsing し, 発 now に variations change の recognize め ら れ た product planning write が about 400 kinds ら れ た. The 伝 of the それら cultural heritage are the same as the を line った. HiCEP, - after the 応 パ タ ー ン か ら selected し た product planning write を ゲ ル か ら extraction, PCR raised し た, ダ イ レ ク ト シ ー ク エ ン ス に よ っ て match column decided し た. Purpose と す る product planning write に つ い て デ ー タ ー ベ ー ス で quite す る も の が have ら れ な か っ た も の に つ い て は, struck に most species の specificprimer し を design, PCR raised し た の ち そ れ ぞ れ に し seaborne て シ ー ク エ ン ス を line っ た. さ ら に, a は product planning write を ユ ニ バ ー サ ル プ ラ イ マ ー に て PCR rights of し た も の を, ク ロ ー ニ ン グ ベ ク タ ー に サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し, coliform の コ ロ ニ ー か ら ダ イ レ ク ト シ ー ク エ ン ス を line っ て match column decided し た. Approximately 300 cultural heritages 伝 are listed in conjunction with を and <s:1> た. ま た, そ れ ら が cells agglutinate に with っ て 発 now - move が recognize め ら れ る か confirm す る た め に, Embryonic cay11.5 の limb bud を with い た cell agglutinate line constitutes を い again, after RNA extraction, real time PCR を っ た. The が of the 伝 sub-products of many く cultural heritages agglomerates to form に accompanied by って and undergoes changes する する とを to confirm た.

项目成果

PlexinD1 deficiency induces defects in axial skeletal morphogenesis

• DOI: 10.1002/jcb.21306
• 发表时间: 2007-08-15
• 期刊: JOURNAL OF CELLULAR BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 4
• 作者: Kanda, Tomoatsu;Yoshida, Yutaka;Noda, Masaki
• 通讯作者: Noda, Masaki

Osteopontin deficiency suppresses high phosphate load-induced bone loss via specific modulation of osteoclasts

• DOI: 10.1210/en.2005-0671
• 发表时间: 2006-06-01
• 期刊: ENDOCRINOLOGY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Koyama, Yuki;Rittling, Susan R.;Noda, Masaki
• 通讯作者: Noda, Masaki

Unloading-induced bone loss was suppressed in gold-thioglucose treated mice.

金硫葡萄糖处理的小鼠中，卸载引起的骨质流失受到抑制。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J Cell Biochem. 99
• 作者: Hino K;Nifuji A;Morinobu M;Tsuji K;Ezura Y;Nakashima K;Yamamoto H;Noda M
• 通讯作者: Noda M

BMP 抑制分子 PRDCの骨芽細胞分化における発現、制御とその機能

BMP抑制分子在PRDC成骨细胞分化中的表达、调控及功能

• 发表时间: 2007
• 作者: 出野 尚;高鍋 利依子;荒木 良子;安倍 真澄;二藤 彰
• 通讯作者: 二藤 彰