下垂体後葉ホルモンの発生工学的可視化法の開発と生理機能解明への応用

垂体后叶激素发育工程可视化方法的开发及其在阐明生理功能中的应用

• 批准号: 16659062
• 负责人: 上田 陽一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659062/
• 关键词: バゾプレッシン; オキシトシン; 蛍光タンパク; 遺伝子改変動物; GFP; パゾプレッシン; トランスジェニックラット

下垂体後葉ホルモンであるバゾプレッシンおよびオキシトシンは、視床下部視索上核および室傍核に存在する神経分泌ニューロンによって産生される。我々は、バゾプレッシン遺伝子とオワンクラゲから同定された緑色蛍光タンパクであるgreen fluorescent protein (GFP)遺伝子の融合遺伝子を用いて、バゾプレッシン産生ニューロンに特異的にGFPタンパクを発現するトランスジェニックラットを作製することに成功した。現在、本学動物センターにおいて順調に繁殖・系統維持している。さらに、オキシトシン産生ニューロンにGFP改変タンパクで赤色蛍光を発するDsRedタンパクを発現させることを目的に、オキシトシン遺伝子とDsRed遺伝子の融合遺伝子を用いてトランスジェニックラットの作製に取りかかった。その結果、ファウンダーとして9ラインのトランスジェニックラットが得られた。これらのラットはサザンブロット法により導入遺伝子のコピー数を検討し、3〜100コピーであることを確認した。ファウンダーをもとに繁殖を行い、得られたF1ラットにおいて視床下部におけるDsRedの発現を蛍光顕微鏡で確認した。現在までのところ、7ラインにおいて確認作業を終えたが、残念ながらすべてDsRedの発現が見られなかった。残り2ラインについては、いずれも雌で出産および仔育て行動に異常が見られるためにF1を確認できずにいる。今後、残り2ラインについて慎重に繁殖を行うこととした。さらに、すべてのラインにDsRedの発現が見られなかった場合、融合遺伝子の見直しを行い、再度トランスジェニックラットの作製を試みる予定である。

The posterior lobe ホ ル モ ン で あ る バ ゾ プ レ ッ シ ン お よ び オ キ シ ト シ ン は, depending on the lower part of the bed on a nuclear お よ び room alongside nuclear に exist す る god 経 secretion ニ ュ ー ロ ン に よ っ て produce さ れ る. I 々 は, バ ゾ プ レ ッ シ ン posthumous son 伝 と オ ワ ン ク ラ ゲ か ら with fixed さ れ た 蛍 green light タ ン パ ク で あ る green fluorescent protein (GFP) heritage 伝 child survived 伝 の fusion を with い て, バ ゾ プ レ ッ シ ン produce ニ ュ ー ロ ン に specific に GFP タ ン パ ク を 発 now す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク ラ ッ ト を cropping す る こ と に successful し た. Now, the animals in this study セ て タ にお にお て て reproduce in a confluent に and maintain the system て て る る. さ ら に, オ キ シ ト シ ン produce ニ ュ ー ロ ン に GFP change - タ ン パ ク で red light 蛍 を 発 す る DsRed タ ン パ ク を 発 now さ せ る こ と を purpose に, オ キ シ ト シ ン posthumous son 伝 と DsRed heritage 伝 child survived 伝 の fusion を with い て ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク ラ ッ ト に take the の cropping り か か っ た. そ の results, フ ァ ウ ン ダ ー と し て 9 ラ イ ン の ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク ラ ッ ト が must ら れ た. こ れ ら の ラ ッ ト は サ ザ ン ブ ロ ッ ト method に よ り import legacy 伝 son の コ ピ ー number を beg し 検, 3 ~ 100 コ ピ ー で あ る こ と を confirm し た. フ ァ ウ ン ダ ー を も と に breeding line を い, ら れ た F1 ラ ッ ト に お い て depending on the lower part of the bed に お け る DsRed の 発 now を 蛍 light 顕 micromirror で confirm し た. Now ま で の と こ ろ, 7 ラ イ ン に お い て affirm that homework を え た が, residual な が ら す べ て DsRed の 発 が now see ら れ な か っ た. Residual り 2 ラ イ ン に つ い て は, い ず れ も female で produce お よ び seed rearing て abnormal action に が see ら れ る た め に F1 を confirm で き ず に い る. In the future, the residual ラ 2ラ に に に に て て て should be cautious about に breeding を and う とと とと た た た た た た た た た た. さ ら に, す べ て の ラ イ ン に DsRed の 発 が now see ら れ な か っ た occasions, fusion but 伝 の see straight し を い, again ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク ラ ッ ト の cropping を try み る designated で あ る.

项目成果

Expression of immediate early genes and vasopressin heteronuclear RNA in the paraventricular and supraoptic nuclei of rats after acute osmotic stimulus

• DOI: 10.1111/j.1365-2826.2005.01297.x
• 发表时间: 2005-04-01
• 期刊: JOURNAL OF NEUROENDOCRINOLOGY
• 影响因子: 3.2
• 作者: Kawasaki, M;Yamaguchi, K;Ueta, Y
• 通讯作者: Ueta, Y

Nephrogenic diabetes insipidus in mice lacking all nitric oxide synthase isoforms

• DOI: 10.1073/pnas.0502236102
• 发表时间: 2005-07-26
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Morishita, T;Tsutsui, M;Yanagihara, N
• 通讯作者: Yanagihara, N

Novel G-protein coupled receptor ligands and neurohypophysial hormones

新型G蛋白偶联受体配体和神经垂体激素

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Neuroendocrinology 16(4)
• 作者: Ueta;Y. et al.
• 通讯作者: Y. et al.

Transgenic expression of enhanced grenn fluorescent protein enables direct visualization for physiological studies of vasopressin neurons and isolated nerve terminals of the rat

增强型 grenn 荧光蛋白的转基因表达能够直接可视化大鼠加压素神经元和离体神经末梢的生理研究

• 发表时间: 2005
• 期刊: Endocrinology 146(1)
• 作者: Ueta;Y. et al.
• 通讯作者: Y. et al.

Potentiation by angiotensin II of spontaneous excitatory postsynaptic currents in rat supraoptic magnocellular neurons

血管紧张素 II 增强大鼠视上大细胞神经元自发兴奋性突触后电流

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Neuroendocrinology 16
• 作者: Ozaki;Y. et al.
• 通讯作者: Y. et al.