遺伝子改変動物による下垂体後葉ホルモン放出機構の可視化と生理機能解明

使用转基因动物对垂体后叶激素释放机制进行可视化和生理功能阐明

• 批准号: 20659035
• 负责人: 上田 陽一
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659035/
• 关键词: シナプス小胞; バゾプレッシン; オキシトシン; イメージング; 遺伝子改変ラット

本研究の目的は、(1)下垂体後葉ホルモン(バゾプレッシンおよびオキシトシン)の分泌動態を可視化すること、(2)in vivoでの分泌動態を生細胞でリアルタイムに観察する技術を開発すること、である。実験には、バゾプレッシンを緑色蛍光タンパク(eGFP)で、オキシトシンを青色蛍光タンパク(eCFP)で標識したトランスジェニックラットを用いた。また、神経活動の指標(分泌動態の指標とも言える)として汎用されているFosタンパクを赤色蛍光タンパク(mRFP)で標識したトランスジェニックラットも用いた。これらのトランスジェニックラットにおいて、1)バゾプレッシンおよびオキシトシンの産生・分泌動態を室傍核・視索上核および下垂体後葉で緑色蛍光もしくは青色蛍光の変化として観察することができた。しかしながら、シナプス小胞レベルでの可視化はできなかった。2)バゾプレッシン-eGFPトランスジェニックの脳室内にコルヒチンを投与して軸索流をブロックすることによりバゾプレッシン産生ニューロンでの緑色蛍光が著明に増強することを観察した。3)バゾプレッシン-eGFPトランスジェニックラットとFos-mRFPトランスジェニックラットの交配によって得られたダブルトランスジェニックラットで、急性浸透圧負荷によって室傍核および視索上核のeGFP陽性細胞(バゾプレッシン産生ニューロン)の細胞質における緑色蛍光の増強(バゾプレッシン産生の増加)とFos-mRFPの発現(神経活動の活性化)を示す赤色蛍光の細胞核が観察できた。4)昨年に引き続き、下垂体後葉における緑色蛍光もしくは青色蛍光強度の変化をリアルタイムで測定する技術の開発・改良を行った。5)視索上核から急性単離後に短期間培養したeGFPもしくはeCFP陽性の神経分泌ニューロンからパッチクランプ法により興奮性および抑制性シナプス入力を記録することができた。

The purpose of this study is: (1) Visualization of the secretion dynamics of the posterior pituitary gland, and (2) in Vivo secretion dynamic を raw cell でリアルタイムに観看する technology を开発すること, である.実験には、バゾプレッシンをGreen 荍光タンパク(eGFP)で、オキシトシンをThe cyan light filter (eCFP) logo is used for the logo.また、神経Activity のINDICATOR(Secretory dynamic ののとも语える) としてGenerally used されているFosタンパクを红荍光タンパク(mRFP)でLOGOしたトランスジェニックラットも用いた.これらのトランスジェニックラットにおいて、1) Production and secretion dynamics of バゾプレッシンおよびオキシトシンのThe paraventricular nucleus and the supraoptic nucleus are located in the posterior lobe of the pituitary gland.しかしながら、シナプス小cellレベルでのvisualizationはできなかった. 2) バゾプレッシン-eGFP トランスジェニックの脳 indoor にコルヒチンをinvestment and してaxial cable flow をブロックすることによりバゾプレッシンproduces ニューロンでのgreen 荍光が出明に嗗强することを観看した. 3) バゾプレッシン-eGFP トランスジェニックラットとFos-mRFP トランスジェニックラットのMATING によって got られたダブルトランスジェニックラットで, acute infiltration pressure load によって Chamber next to the nuclear および sight line The nuclear eGFP-positive cells (バゾプレッシンproduced ニューロン) and the cytoplasmic green light were enhanced (バゾプレッThe increase in the production of Fos-mRFP and the activation of the activity of Fos-mRFP are shown in the red light of the nucleus and the observation of the nucleus. 4) Last year, the color of the posterior pituitary gland and the color of the posterior pituitary gland were green and green. Light intensity change measurement technology is developed and improved. 5) The supraoptic nucleus has been cultured for a short time after acute isolation, and the eGFP positive gene has been secreted by eCFP.ーロンからパッチクランプ法によりexcitatory およびinhibitory シナプス入力をrecord することができた.

项目成果

オキシトシン-eCFPトランスジェニックラットへの浸透圧負荷の検討

催产素-eCFP转基因大鼠渗透压负荷的检测

• 发表时间: 2009
• 作者: Shigeo Sasawatari;et al.;加藤明子
• 通讯作者: 加藤明子

Induction of the Arginine Vasopressin-enhanced Green Fluorescent Protein Fusion Gene in the Rat Locus Coeruleus.

大鼠蓝斑中精氨酸加压素增强的绿色荧光蛋白融合基因的诱导。

• 发表时间: 2009
• 作者: Todoroki;M.
• 通讯作者: M.

The expression of the vasopressin-enhanced green fluorescent protein fusion gene in the hypothalamo-pituitary system in rats : a new aspect of vasopressin dynamics.

大鼠下丘脑-垂体系统中加压素增强的绿色荧光蛋白融合基因的表达：加压素动力学的新方面。

• 发表时间: 2010
• 作者: Ueta;Y.
• 通讯作者: Y.

Green Fluorescent Vasopressin Neurons Express Nuclear Red Fluoresc ence after Osmotic Stimulation in a Double Transgenic Rat.

双转基因大鼠经渗透刺激后，绿色荧光加压素神经元表达核红色荧光。

• 发表时间: 2009
• 作者: Fujihara;H.
• 通讯作者: H.

バゾプレッシンニューロンと浸透圧調節:TRPの関与

加压素神经元和渗透压调节：TRP 的参与

• 发表时间: 2009
• 作者: Tatsushi Igaki;Tian Xu;上田陽一
• 通讯作者: 上田陽一