メニンによるエストロゲンレセプター転写調節機構の解明

阐明menin对雌激素受体转录调控机制

• 批准号: 16659336
• 负责人: 山内 清明
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Kagawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659336/
• 关键词: メニン; 乳癌; ホルモン療法; エストロゲンレセプター; 転写; 乳がん

メニンは多発性内分泌腺腫症1型の責任遺伝子men1の遺伝子産物で、副腎腫瘍や副甲状腺腫瘍を構成する腺腫細胞の核内に存在する。メニンはproto-oncogeneであるJun Dや転写因子NF-kappa Bに結合し、その機能を阻害することが報告されている。一方、乳癌細胞の増殖や蛋白合成に強く関与しているエストロゲンレセプター(ER)はその転写機構が各種核内蛋白により制御されている。今回我々は、核内蛋白であるメニンが乳癌細胞におけるERの転写活性を調節する可能性を検討した。【方法】(1)乳癌細胞におけるメニンの発現解析:摘出乳癌組織5例におけるmen1-mRNAの発現をRT-PCR法で、またエストロゲン依存性乳癌細胞株MCF-7におけるメニン蛋白の発現をwestern blot法で解析した。(2)Reporter gene assay:MCF-7にERE-lucおよびwild type(wt)-men1あるいはmutant(mu)-men1を遺伝子導入し、ルシフェラーゼ活性を測定した。(3)GST-pull down assay:GSTとER-alphaとの融合蛋白を作成し、グルタチオンが結合したレジンに^<35>S-メチオニンでラベルしたメニンを添加後10分間反応させ、レジンを洗浄後煮沸、上清をSDS-PAGEにて展開後、autoradiographyを施行した。【結果】(1)RT-PCT法では5例の乳癌組織においてメニンmRNAの発現を認めた。またwestern blot法ではMCF-7各種亜株においてメニン蛋白の発現を認めた。(2)Reporter gene assayでは、wt-men1導入株はmu-men1導入株より3倍以上強いルシフェラーゼ活性を示した。またその活性はTamoxifenで阻害されなかった。(3)GST-pull down assayではメニンとERが物理的に結合する可能性が示唆された。【総括】メニンはNF-kappa Bに対する機能とは逆に、ERに結合してその転写活性を促進することが示唆された。今後、メニンのエストロゲン転写活性促進機構の詳細、細胞周期との関連、men1遺伝子の変異を明らかにすると共に、乳癌ホルモン療法症例におけるメニン発現とTamoxifenの効果との関連を解析する臨床試験を準備中である。

The presence of gene products of the responsible gene men1 in the nucleus of adenoma cells composed of multiple endocrine adenomas type 1, adrenal adenomas and parathyroid tumors. Jun D, NF-kappa B, and other functional barriers are reported. The proliferation and protein synthesis of breast cancer cells are strongly related to the regulation of various nuclear proteins by ER mechanisms. This paper discusses the possibility of regulating ER activity in breast cancer cells by nuclear proteins. [Methods](1) Analysis of the expression of mRNA in breast cancer cells: The expression of mRNA in 5 breast cancer tissues was analyzed by RT-PCR and western blot in MCF-7 cells. (2)Reporter gene assay:MCF-7 ERE-luc wild type(wt)-men 1 mutant(mu)-men1 (3)GST-pull down assay:GST and ER-alpha fusion protein was <35>prepared, combined, and then added. After 10 minutes of reaction, the supernatant was washed and boiled, and SDS-PAGE was developed. Autoradiography was performed. [Results](1)RT-PCT method could identify the mRNA expression in breast cancer tissues of 5 cases. Western blot method was used to identify the protein expression of MCF-7. (2)Reporter gene assay: wt-men1 introduced strain: mu-men1 introduced strain: more than 3 times stronger than wt-men1 introduced strain. The activity of Tamoxifen is blocked. (3)GST-pull-down assay is not suitable for physical combination. [Summary] NF-kappa B function is reversed, ER is combined, and writing activity is promoted. In the future, we will prepare for clinical trials in which we will write details of activity promotion mechanisms, relationships between cell cycles, differences in the expression of men1 genes, and the analysis of relationships between Tamoxifen and breast cancer therapy.