個別化治療のためのDNA修復遺伝子メチル化を分子マーカーとした血清診断法の構築

以DNA修复基因甲基化作为个体化治疗分子标记的血清诊断方法的构建

• 批准号: 16659361
• 负责人: 宮崎 耕治
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Saga University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659361/
• 关键词: MGMT; hMLH1; CHFR; DNAメチル化; 血清; 抗癌剤感受性; 消化器癌; Methylight

本研究では、DNA修復遺伝子MGMT, hMLH1さらには細胞分裂関連遺伝子CHFRのメチル化が、アルキル化剤およびチューブリン作用剤による抗癌剤治療の感受性マーカーとなることを前提に、血清メチル化解析を行うことで手術不能患者も含めた癌個別化治療戦略の可能性を解析・検討した。尚、血清の採取においては充分なインフォームドコンセントのもと、本学の倫理委員会にて承認されている同意書に基づいて行った。まず、血清DNAメチル化が癌組織DNAメチル化を反映しているか否かについて以下の実験を試みた。術前に血清が得られた胃癌23例(手術例14例),肝癌19例(手術例10例),胆道癌3例(手術例2例)を対象とした.MGMT, hMLH1遺伝子メチル化は胃癌,肝癌,胆道癌に対して,CHFR遺伝子メチル化は胃癌に対して解析を行った.方法は、腫瘍組織および血清中DNAを申請したBioRobot EZ1(QIAGEN)を用いて抽出後、Bisulfite化学処理を施し,Methylation-specific PCR (MSP)法あるいはMethyLight法にて微量であることが予測される血清中メチル化の検出を行った.このMethyLight法により,通常のMSP法に比べ10〜100倍のメチル化検出感度が得られることを確認した.【結果】1)血清におけるMGMT高メチル化は,胃癌0例,肝癌2例(11%),胆道癌1例(33%),hMLH1高メチル化は胃癌3例(13%),肝癌2例(11%),胆道癌0例,CHFR高メチル化は胃癌1例(4%)であった.血清中の高メチル化検出例は全例,高度進行による手術非施行例もしくは腫瘍組織の高メチル化症例であった.血清中DNAメチル化同定法は検出感度は低いものの,癌細胞由来の特異的メチル化DNAであることが示され、手術不能な癌患者に対しても、抗癌剤感受性予測を行い至適抗癌剤の選択を行い得る可能性が示唆された.今後さらなる症例の蓄積を行い、解析を継続していく予定である。

This study aims to explore the possibility of individualized treatment of cancer in inoperable patients by analyzing the DNA repair gene MGMT, hMLH1, and the sensitivity of cell division related gene CHFR to anticancer agents. The Ethics Committee of the University recognizes that the consent form for the adoption of the serum is based on the consent form for the adoption of the serum. The serum DNA profile of cancer tissue is reflected in the following information: Preoperative serum was obtained in 23 cases of gastric cancer (14 cases operated), 19 cases of liver cancer (10 cases operated) and 3 cases of biliary tract cancer (2 cases operated). Methods DNA in tumor tissue and serum was extracted with BioRobot EZ1(QIAGEN) and treated with Bisulfite. Methylation-specific PCR (MSP) was used to detect DNA in tumor tissue and serum. The MethyLight method is usually 10 ~ 100 times more sensitive than the MSP method. Results 1) High serum MGMT levels, gastric cancer 0 cases, liver cancer 2 cases (11%), biliary tract cancer 1 case (33%), hMLH1 high serum MGMT levels, gastric cancer 3 cases (13%), liver cancer 2 cases (11%), biliary tract cancer 0 cases,CHFR high serum MGMT levels, gastric cancer 1 case (4%). High levels of serum cholesterol were found in all cases, highly advanced in surgical non-operative cases, and high levels of cholesterol in tumor tissue. DNA sequencing in serum indicates that sensitivity is low and that cancer cells are derived from specific DNA sequencing. In the future, the accumulation of symptoms will be determined.

项目成果

Tumor progression through epigenetic gene silencing of MGMT in human biliary tract cancers.

人胆道癌中 MGMT 表观遗传基因沉默导致的肿瘤进展。

• 期刊: Ann Surgical Oncol (In press)
• 作者: Kazunari Akiyoshi;et al.;K.Sato et al.;Y.Koga et al.
• 通讯作者: Y.Koga et al.

Cisplatin represses transcriptional activity from the minimal promoter of MGMT gene and increases sensitivity of human gallbladder cancer cells.

顺铂抑制 MGMT 基因最小启动子的转录活性，并增加人胆囊癌细胞的敏感性。

• 期刊: Oncology Reports (In press)
• 作者: Kazunari Akiyoshi;et al.;K.Sato et al.
• 通讯作者: K.Sato et al.