ミスマッチ修復遺伝子hMLH1の転写制御機構の解明:転写因子の同定とその異常検索

阐明错配修复基因hMLH1的转录控制机制：鉴定转录因子并寻找其异常

• 批准号: 15790735
• 负责人: 有田 通恒
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790735/
• 关键词: hMLH1; 転写調節因子; 転写制御機構; p29; 酵母one-hybrid法; タンパク結合部位; TIF1α; c6orf145; ch6Orf145; DNAミスマッチ修復遺伝子; hMLH1遺伝子; 大腸癌; 転写調節機構; 転写因子

本研究では,hMLH1遺伝子転写制御に重要な3ヵ所のタンパク部位(FP3,FP6,CCAAT-box)に着目し,これら部位に結合する転写調節因子を検索・同定することを目的とした.前年度までに,FP3へのタンパク結合増強作用を有する因子としてp29 GCIP-interacting proteinを,また,FP6結合タンパクの候補としてTIF1αおよびC6orf145を見い出した.本年度は,TIF1αとC6orf145のDNA結合能とhMLH1遺伝子転写調節活性を調べるとともに,これらタンパクが転写調節因子として同定された場合は,p29タンパクとの相互作用を検討することを計画した.酵母one-hybridスクリーニングにより得られたTIF1α及びC6orf145のクローンはいずれも不完全長cDNAであった.そこでまず,得られたcDNA配列を哺乳細胞発現ベクターに組み込みそれぞれのタンパク発現プラスミドを構築した.これらプラスミドを導入した hMLH1発現ヒト大腸癌由来細胞の核抽出物を用いてFP6配列をプローブとしたゲルシフト解析を行い,シフトバンドの増強もしくは新たなシフトバンドの有無を調べた.しかしながら,増強及び新規バンドのいずれも認められなかった.用いたcDNAクローンは不完全長タンパクとして発現するために,細胞内で不安定である可能性が高いと考えられた.これら候補遺伝子のDNA結合能並びに転写調製活性の確認には完全長cDNAが不可欠であるため,現在完全長cDNAのクローニングを行っている.これまでのところ,DNAに直接結合しhMLH1遺伝子の転写を制御する因子の同定には至っていない.しかしながら,本研究により複数の候補タンパクを見い出したことから,今後これらタンパクを中心にタンパク管相互作用を指標とした転写調節因子の検索も可能になったと考えられる.

This study で は, traces of hMLH1 伝 son planning write suppression に important な 3 ヵ の タ ン パ ク parts (FP3, FP6, CCAAT box) に mesh し, こ れ に ら parts combine す る planning write adjustment factor を 検 DE with fixed す る こ と を purpose と し た. Before the annual ま で に, FP3 へ の タ ン パ ク combined with strong rights action を す る factor と し て p29 GCIP - interacting protein を, ま た, FP6 combining タ ン パ ク の alternate と し て TIF1 alpha お よ び C6orf145 を see い out し た. This year は TIF1 alpha と C6orf145 の DNA binding energy と hMLH1 heritage 伝 son planning write activity を adjustment べ る と と も に, こ れ ら タ ン パ ク が planning write adjustment factor と し て with fixed さ れ は た situations, p29 タ ン パ ク と の interaction を beg す 検 る こ と を project し た. Yeast one hybrid - ス ク リ ー ニ ン グ に よ り have ら れ た TIF1 alpha and び C6orf145 の ク ロ ー ン は い ず れ も incomplete long cDNA で あ っ た. そ こ で ま ず, too ら れ た cDNA match column を mammalian cells 発 now ベ ク タ ー に group み 込 み そ れ ぞ れ の タ ン パ ク 発 now プ ラ ス ミ ド を build し た. こ れ Youdaoplaceholder0 らプラス ドを import た HMLH1 発 now ヒ ト colorectal cancer origin の nuclear extract を with い て FP6 match column を プ ロ ー ブ と し た ゲ ル シ フ ト parsing を い, シ フ ト バ ン ド の raised strong も し く は new た な シ フ ト バ ン ド の presence of を adjustable べ た. し か し な が ら, strong rights and び new rules バ ン ド の い ず れ も recognize め ら れ な か っ た. With い た cDNA ク ロ ー ン は incomplete long タ ン パ ク と し て 発 now す る た め に, intracellular で unrest で あ likely が る い と exam え ら れ た. こ れ ら alternate heritage 伝 son の DNA binding energy and び に planning write modulation activity の confirm に は completely long cDNA が not owe で あ る た め, now completely long cDNA の ク ロ ー ニ ン グ を line っ て い る. こ れ ま で の と こ ろ, DNA に directly combined し hMLH1 posthumous son 伝 の planning write を suppression す る factor の with fixed に は to っ て い な い. し か し な が ら, this study に よ り plural の alternate タ ン パ ク を see い out し た こ と か ら, future こ れ ら タ ン パ ク を center に タ ン パ ク tube interaction を index と し た planning write adjustment factor の 検 So えられる might になったと test えられる.

项目成果

Arita M: "Multiple sites required for expression in 5'-flanking region of the hMLH1 gene"Gene. 306・1. 57-65 (2003)

Arita M：“hMLH1 基因 5-侧翼区域中的表达所需的多个位点”基因 306·1。

Hypersensitivity in DNA mismatch repair-deficient colon carcinoma cells to DNA polymerase reaction inhibitors

• DOI: 10.1016/j.canlet.2004.07.044
• 发表时间: 2005-03-18
• 期刊: CANCER LETTERS
• 影响因子: 9.7
• 作者: Takahashi, T;Min, Z;Hemmi, H
• 通讯作者: Hemmi, H