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ミスマッチ修復遺伝子hMLH1の転写制御機構の解明:転写因子の同定とその異常検索

阐明错配修复基因hMLH1的转录控制机制：鉴定转录因子并寻找其异常

基本信息

批准号：
15790735
负责人：
有田通恒
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では,hMLH1遺伝子転写制御に重要な3ヵ所のタンパク部位(FP3,FP6,CCAAT-box)に着目し,これら部位に結合する転写調節因子を検索・同定することを目的とした.前年度までに,FP3へのタンパク結合増強作用を有する因子としてp29 GCIP-interacting proteinを,また,FP6結合タンパクの候補としてTIF1αおよびC6orf145を見い出した.本年度は,TIF1αとC6orf145のDNA結合能とhMLH1遺伝子転写調節活性を調べるとともに,これらタンパクが転写調節因子として同定された場合は,p29タンパクとの相互作用を検討することを計画した.酵母one-hybridスクリーニングにより得られたTIF1α及びC6orf145のクローンはいずれも不完全長cDNAであった.そこでまず,得られたcDNA配列を哺乳細胞発現ベクターに組み込みそれぞれのタンパク発現プラスミドを構築した.これらプラスミドを導入した hMLH1発現ヒト大腸癌由来細胞の核抽出物を用いてFP6配列をプローブとしたゲルシフト解析を行い,シフトバンドの増強もしくは新たなシフトバンドの有無を調べた.しかしながら,増強及び新規バンドのいずれも認められなかった.用いたcDNAクローンは不完全長タンパクとして発現するために,細胞内で不安定である可能性が高いと考えられた.これら候補遺伝子のDNA結合能並びに転写調製活性の確認には完全長cDNAが不可欠であるため,現在完全長cDNAのクローニングを行っている.これまでのところ,DNAに直接結合しhMLH1遺伝子の転写を制御する因子の同定には至っていない.しかしながら,本研究により複数の候補タンパクを見い出したことから,今後これらタンパクを中心にタンパク管相互作用を指標とした転写調節因子の検索も可能になったと考えられる.

In this study, hMLH1 gene expression control important part of the three parts (FP3, FP6,CCAAT-box) to target, these parts of the combination of the two parts to write regulatory factors to achieve the same goal. In the past year, FP3 binding enhancement factor was found in p29 GCIP-interacting protein, FP6 binding enhancement factor was found in TIF1 α and C6orf145. This year, the DNA binding energy of TIF1 α and C6 orf145 and the regulatory activity of hMLH1 gene were modulated. The full-length cDNA of TIF1α and C6orf145 was obtained from the single-hybrid cDNA library. The cDNA sequence was obtained from mammalian cells and constructed from the cDNA sequence of mammalian cells. The hMLH1 gene was introduced into the genome of colorectal cancer cells, and the hMLH1 gene was expressed in the genome of colorectal cancer cells. The new rules and regulations will be strengthened and strengthened. The possibility of intracellular instability is high when using cDNA to detect incomplete growth. The DNA binding ability of candidate genes and the identification of their modulation activity are not limited to full-length cDNA, but are now fully long cDNA. DNA binds directly to hMLH1 gene and controls the transcription of genes. In this study, the number of candidates for the central tube interaction index was determined.