生体防御系におけるプロテアーゼの機能解析

生物防御系统中蛋白酶的功能分析

• 批准号: 16659514
• 负责人: 山本 健二
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659514/
• 关键词: 感染症; 癌; 歯学; 免疫学; 薬理学; アスパラギン酸プロテアーゼ; エンドソーム・リソソーム系; カテプシンD; カテプシンE; ノックアウト; オートファジー; 生体防御; 蛋白質分解

本年度は、生体防御系におけるエンドリソソーム系アスパラギン酸プロテアーゼのカテプシンEの役割について解析した。カテプシンEは抗原提示細胞やリンパ球などの免疫担当細胞に多く発現し、活性化に伴いその多くが細胞外に分泌される。我々は、カテプシンE欠損マウスを世界に先駆けて作製し、その性状を解析してきた。今回、カテプシンE欠損マクロファージの性状と機能変化をさまざまな角度から検討した。カテプシンE欠損マクロファージは正常マクロファージに比べて、各種Toll-like receptorsのリガンドに対する応答性が悪く、各種細菌の感染に対して抵抗性が低いことが示された。細胞表面ならびに細胞全体の各種Toll-like receptors量をFACSで解析すると、全体量はカテプシンE欠損マクロファージと正常細胞で変わらないものの、細胞表面の発現量が前者で有意に減少していることが明らかにされた。一方、カテプシンE欠損マクロファージでは、正常細胞に比べて、リソソーム性膜シアロ糖蛋白質のLAMP-1,LAMP-2およびLIMP-2/LGP85が蓄積していること、これと並行して、リソソーム性pHが有意に上昇していること、および可溶性リソソーム性蛋白質の細胞外分泌が亢進していることが示された。LAMP-1,LAMP-2およびLIMP-2/LGP85のmRNAレベルや生合成には異常が認められず、ターンオーバーレートが遅延していることから、カテプシンEがこれらの膜蛋白質の分解に直接関与していることが強く示唆された。カテプシンE欠損マクロファージにおけるLAMP-1,LAMP-2およびLIMP-2/LGP85の蓄積とリソソーム性pHの上昇が細胞機能にどのような影響を及ぼしているのかを調べる目的で、細菌感染に対する殺菌能ならびに外来蛋白質の分解能について解析した。その結果、カテプシンE欠損マクロファージは正常細胞に比べて、殺菌能および外来蛋白質の分解能のいずれも著明に減少していることがわかった。以上の結果から、カテプシンEはリソソーム性膜シアロ糖蛋白質の分解に直接関与し、それを通じて、エンドリソソーム性蛋白質分解システムの正常性を維持し、細胞機能の恒常性に寄与していることが明らかとなった。

This year, the biological defense system has been analyzed in detail. The antigen is expressed in many cells, activated in many cells and secreted outside the cells. I want you to know that I'm not the only one who's going to be able to do this. Now, the problem is that we need to change the angle of the character and function of the character. The disease is caused by a variety of bacteria, such as bacteria, etc. The amount of Toll-like receptors on the cell surface and on the whole cell was analyzed by FACS. The amount of Toll-like receptors on the cell surface was intentionally reduced in normal cells. In contrast, LAMP-1,LAMP-2 and LIMP-2/LGP85 accumulated in normal cells and increased extracellular secretion of soluble and soluble proteins. LAMP-1,LAMP-2 and LIMP-2/LGP85 mRNA synthesis abnormalities are directly related to the breakdown of membrane proteins. The accumulation of LAMP-1,LAMP-2 and LIMP-2/LGP85 in the presence of IPTG and IPTG, the increase of pH, the effect of IPTG on cell function and the regulation of IPTG and IPTG in the presence of pathogenic bacteria, and the analysis of protein degradation from foreign proteins. As a result, the protein breakdown ability of normal cells was reduced. The above results show that the protein decomposition of the flexible membrane is directly related to the normal maintenance of the protein decomposition of the flexible membrane, and the stability of the cell function is directly related to the normal maintenance of the protein decomposition.

项目成果

Processing of chicken progastrin at post-Phe bonds by aspartyl protease.

用天冬氨酰蛋白酶处理鸡前胃泌素后苯丙氨酸键。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biochim. Biophys. Acta. 1748
• 作者: Jensen;H. et al.
• 通讯作者: H. et al.

Characterization of rat cathepsin E and its mutants changing active site residues and lacking pro^parts and N-glucosylation expressed in human embryonic kidney 293T cells.

大鼠组织蛋白酶 E 及其突变体的表征，其改变了人胚胎肾 293T 细胞中表达的活性位点残基并缺乏残基和 N-葡萄糖基化。

• 发表时间: 2006
• 期刊: FEBS J. 273
• 作者: Tsukuba;T. et al.
• 通讯作者: T. et al.

A role for cathepsin E in the processing of mast-cell carboxypeptidase A

• DOI: 10.1242/jcs.02333
• 发表时间: 2005-05-01
• 期刊: JOURNAL OF CELL SCIENCE
• 影响因子: 4
• 作者: Henningsson, F;Yamamoto, K;Pejler, G
• 通讯作者: Pejler, G

Suppression of pathogenicity of Porphyromonas gingivalis by newly developed gingipain inhibitors

• DOI: 10.1124/mol.104.004366
• 发表时间: 2004-12-01
• 期刊: MOLECULAR PHARMACOLOGY
• 影响因子: 3.6
• 作者: Kadowaki, T;Baba, A;Yamamoto, K
• 通讯作者: Yamamoto, K

The role of the cathepsin E propeptide in correct folding, maturation and sorting to the endosome

组织蛋白酶 E 前肽在内体正确折叠、成熟和分选中的作用

• 发表时间: 2005
• 期刊: J.Biochem. 138
• 作者: Yasuda Y.;et al.
• 通讯作者: et al.