MMP-9/RNAiによる癌の浸潤転移抑制と細胞分化療法の開発

利用MMP-9/RNAi抑制癌症侵袭和转移以及开发细胞分化疗法

• 批准号: 16659560
• 负责人: 柴田 考典
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Health Sciences University of Hokkaido
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659560/
• 关键词: MMP-9高産生癌細胞; MMP-9高発現クローン; 癌細胞遊走能; 基底膜浸潤能; 細胞直接性; 細胞間接着分子; RNAi; 細胞分化療法; 細胞接着性

研究目的:口腔扁平上皮癌細胞のMMP-9mRNAをsiRNAでノックダウンした際の細胞のシグナル分子や接着分子の挙動を明らかにして、MMP-9を標的としたRNAiによる癌治療効果について検討した。研究方法:細胞として浸潤能が亢進している培養ヒト口腔扁平上皮癌細胞株SAS-H1、IS-FOM、BSC-OFを用いた。1.MMP-9高産生細胞の作製:ヒトMMP-9遺伝子はGeBank accession No.NM-004994からRNA sequenceを得て、そのcoding region 377-403をもとにPCRにより全長を得て、lacZ-レポーター遺伝子プロモーター領域をつないだアデノウィルスプラスミドベクターを用いて遺伝子導入を行った。G418の選択培地でMMP-9高発現クローンを得た後、MMP-9産生をゼラチンザイモグラフィで確認した。2.MMP-9高発現クローンの浸潤性への影響:Transwell chamber上に2×10^4個の細胞を播種して、培養後16時間経過し8μmのporeを有するpolycarbonate filterを通過した細胞数を測定し細胞遊走能を評価した。また、培養後72時間経過し再構成基底膜matrigel^<TM>をコートした同数のpolycarbonate filter(30μg/filter)を通過した細胞数を計測し、基底膜浸潤能として評価した。さらに基底膜基質としてmatrigel^<TM>、fibronectin、laminin、collagen typeIIIおよびcollagen typeIVをそれぞれコートした35-mm培養皿(BIOCOAT Cellware : BD lab)に1×10^5個の細胞を播種して、培養後6時間経過時の培養皿底面に付着した細胞を回収し、ヘモサイトメーターで計測し、細胞接着性の評価を行った。結果:1.MMP-9高発現クローンを作製し、MMP-9産生がゼラチンザイモグラフィで確認された。2.クローン株の細胞遊走能、基底膜浸潤能、および細胞接着性について現在計測中である。

研究目的：我们研究了用siRNA敲除口服鳞状细胞癌细胞的MMP-9 mRNA时细胞信号和粘附分子的行为，并使用靶向MMP-9的RNAI检查了癌症治疗的效果。研究方法：培养的人口腔鳞状细胞癌细胞系SAS-H1，是侵入性潜力的最高和BSC，被用作细胞。 1。制备高产生的MMP-9细胞：人类MMP-9基因是从Gebank登录NM-004994获得的，并且根据PCR基于编码区域377-403获得了整个长度，并且使用腺囊质虫载体载体连接到Lace rece reporporporporporerter porporter porporter porporerer proserer eNACERERERERERERERERERERERERATERANE GENE ENCORETER ENAINCERATION GENE ERAINCE。在G418选择性培养基中获得高度表达的MMP-9克隆后，通过明胶酶学证实了MMP-9的产生。 2。MMP-9高表达克隆对侵袭性的影响：2×10^4细胞在Transwell腔室中播种，并且在孵育后16小时后测量了通过孔内8μM的聚碳酸酯过滤器的细胞数量，以评估细胞迁移能力。此外，通过测量培养后，经过72小时后，经过相同数量的聚碳酸酯过滤器（30μg/滤光片）的细胞数量，并作为基底膜侵袭能力进行了评估。此外，将1×10^5个细胞播种在35毫米培养皿中（野生细胞器件：BD实验室），涂有基质^<tm>，纤连蛋白，层粘连蛋白，III型和III型胶原蛋白和IV型胶原蛋白和胶原蛋白型和地基膜底物的collition培养的细胞的培养基的培养基均在6小时后的培养物中，并在6小时内融合了培养基，被评估。结果：1。产生高度表达的MMP-9克隆，并通过明胶Zymography证实MMP-9的产生。 2。当前正在测量克隆菌株迁移，基底膜侵袭和细胞粘附的能力。

项目成果

Tumor growth, local invasion, micrometastasis lymph node metastasis of oral squamous cell carcinoma visualized in live tissue by green expession

通过绿色表达在活组织中可视化口腔鳞状细胞癌的肿瘤生长、局部侵袭、微转移淋巴结转移

• 发表时间: 2005
• 期刊: Oral Science International Vol.2 (In press)
• 作者: Akifumi Ito;Kazuhiko Okumura;Takanori Shibata et al.
• 通讯作者: Takanori Shibata et al.

Tumor growth, local invasion, micrometastasis lymph node metastasis of oral squamous cell carcinoma visualized in live tissue by green protein expession

通过绿色蛋白表达在活组织中可视化口腔鳞状细胞癌的肿瘤生长、局部侵袭、微转移淋巴结转移

• 发表时间: 2005
• 期刊: Oral Science International Vol.2
• 作者: Akifumi Ito;Kazuhiko Okumura;Takanori Shibata et al.
• 通讯作者: Takanori Shibata et al.