多光子顕微鏡によるレーザー分子不活性化を用いた生細胞内局所での蛋白質機能阻害

使用多光子显微镜使用激光分子灭活技术局部抑制活细胞内的蛋白质功能

• 批准号: 17657065
• 负责人: 小山田 正人
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17657065/
• 关键词: 細胞・組織; 生体分子; 蛋白質; CALI; 多光子顕微鏡; レーザー

ポストゲノム時代に入り、生細胞で蛋白質の機能を解明することの重要性が増してきた。現在、蛋白質の機能解析には、細胞全体の蛋白質発現を低下させる、遺伝子ノックアウト法やRNAi法が広く用いられている。一方、単一の蛋白質が細胞内の異なった領域や細胞周期の特定のステージで、独自の機能を果たすことも分かってきた。しかし、従来の蛋白質の機能阻害は細胞の全体で起こり、特定の領域やステージでの蛋白質の機能を解析することは困難であった。われわれは、生細胞局所における蛋白質機能を明らかにするため、外因性に発現させた蛍光蛋白質EGFPとの融合蛋白質を機能阻害のターゲットとする多光子CALI(chromophore-assisted laser inactivation)を開発し、外因性EGFP融合蛋白質の機能を任意の領域と時点で選択的に阻害可能であることを報告してきた。今年度は、多光子CALIにより、内在性蛋白質の機能阻害が可能であるか否かを明らかにすることを目的として研究を行った。ギャップ結合は、隣接する細胞同士のコネキシン蛋白質(CX)の6量体が結合することによって形成される。そこで、元々ギャップ結合を有しないHeLa細胞に、野生型Cx43発現ベクターとCx43-EGFP発現ベクターとを同時に遺伝子導入を行い、多光子CALIによる機能阻害を解析した。この結果、Cx43-EGの存在下では、野生型Cx43の機能阻害が観察され、多光子CALIにより、内在性蛋白質の機能阻害が可能であるが分かった。

In recent years, we have been able to understand the importance and importance of cellular protein production. At present, the protein machine can be used to analyze the protein, the whole cell can analyze the protein in the low level, and the RNAi method is used to analyze the protein in the whole cell. One party, one protein, the cell cycle, the specific cycle, the cell cycle and the cell cycle. The protein machine can prevent the whole cell from turning off, and the protein machine in a specific field can be used to analyze the problem. The protein machine operated by the Department of Health and the Bureau of Health can detect the light protein, the EGFP fusion protein, the multiphoton CALI (chromophore-assisted laser inactivation), and the exogenous EGFP fusion protein that can be selected at any time in the field. This year's, multi-photon CALI transmission, and internal protein machines can prevent possible changes in the performance of research. The weight of protein protein (CX) 6 was measured and combined with each other to form a clot. The combination of real-time and metamorphic data shows that the HeLa cell, the wild-type Cx43 can detect the Cx43-EGFP, and the multi-photon CALI printer can block the parser. The results showed that the presence of Cx43-EG, the wild type of Cx43 could block the detection of surveillance, the multiphoton CALI detection, and the internal protein could block the detection of possible interference.

项目成果

レーザーで生細胞内の機能分子を可視化する

用激光可视化活细胞内的功能分子

• 发表时间: 2006
• 期刊: レーザー研究 34
• 作者: 小山田 正人;高松 哲郎
• 通讯作者: 高松 哲郎

Gap junctions mediate glucose transport between GLUTl-positive and -negative cells in the spiral limbus of the rat cochlea

间隙连接介导大鼠耳蜗螺旋缘中GLUT1阳性和阴性细胞之间的葡萄糖转运

• 发表时间: 2006
• 期刊: Cell Commun. Adhes. 13
• 作者: T.Matsunami;T.Suzuki;Y.Hisa;K.Takata;T.Takamatsu;M Oyamada
• 通讯作者: M Oyamada

In situ Ca2+ dynamics of Purkinje fibers and its interconnection with subjacent ventricular myocytes

• DOI: 10.1016/j.yjmcc.2005.01.004
• 发表时间: 2005-04-01
• 期刊: JOURNAL OF MOLECULAR AND CELLULAR CARDIOLOGY
• 影响因子: 5
• 作者: Hamamoto, T;Tanaka, H;Takamatsu, T
• 通讯作者: Takamatsu, T

Multiphoton excitation-evoked chromophore-assisted laser inactivation using green fluorescent protein

• DOI: 10.1038/nmeth770
• 发表时间: 2005-07-01
• 期刊: NATURE METHODS
• 影响因子: 48
• 作者: Tanabe, T;Oyamada, M;Takamatsu, T
• 通讯作者: Takamatsu, T

Different changes in the expression of multiple kinds of tight-junction proteins during ischemia-reperfusion injury of the rat ileum.

大鼠回肠缺血再灌注损伤期间多种紧密结蛋白表达的不同变化。

• DOI: 10.1267/ahc.05048
• 发表时间: 2006-04-22
• 期刊: ACTA HISTOCHEMICA ET CYTOCHEMICA
• 影响因子: 2.4
• 作者: Inoue, Kaori;Oyamada, Masahito;Mitsufuji, Shoji;Okanoue, Takeshi;Takamatsu, Tetsuro
• 通讯作者: Takamatsu, Tetsuro