雄性生殖幹細胞移植法及び精細管移植法を用いた生殖毒性試験法の確立

雄性生殖干细胞移植法和生精小管移植法生殖毒性试验方法的建立

• 批准号: 17658120
• 负责人: 九郎丸 正道
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17658120/
• 关键词: 生殖幹細胞; 精細管; 移植法; 精子発生; MEHP; セルトリ細胞培養系; 精巣器官培養系; ビメンチン; XX精巣; 移植; 円形精子細胞; 伸長型精子細胞; ectoplasmic specialization; F-アクチン; 接着機構

まず、正常マウス(ドナー)より採材、調整した生殖幹細胞ないし精細管断片を、遺伝的に生殖細胞を欠如したW/W^vマウス精巣(レシピエント)へ移植し、移植後の精細胞の精子発生能について検討した。移植3ヶ月後にレシピエントより精巣を採材、組織学的、免疫組織化学的に詳細な解析を試みた。その結果、生殖幹細胞移植及び精細管断片移植とも、レシピエント側精巣内において、明瞭な精子発生の進行が確認され、本実験系を用いた薬物の毒性作用試験の可能性が確認された。次に、若齢のマウス及びラット精巣に対するMono(2-ethylhexyl)phthalate(MEHP)の影響を、光学顕微鏡並びに透過型電子顕微鏡により観察した。その結果、MEHPは精巣重量を有意に減少させ、またTUNEL陽性細胞の有意な増加が認められた。より高濃度のMEHP投与群では、マウス、ラットとも変性した精細胞が観察された。セルトリ細胞細胞質の空胞化及び精細胞の精細管腔への脱落も確認された。マウスとラットの比較では、MEHPの精巣毒性に対して、マウスがラットに比べ、かなり感受性が低いことが判明した。さらに、セルトリ細胞初代培養系及び精巣器官培養系を用いて、MEHPがもたらすセルトリ細胞の異常について解析した。若齢マウス精巣より立ち上げたセルトリ細胞培養系及び精巣器官培養系にMEHPを添加後、採材した。MEHP添加セルトリ細胞培養系のトルイジンブルー染色の結果、セルトリ細胞細胞質における空胞の数と大きさの増大が認められた。また、ビメンチン免疫染色の結果、セルトリ細胞培養系及び精巣器官培養系において、MEHP添加による時間、濃度依存的なビメンチン反応の減少が確認された。さらに、Fアクチンの崩壊が、MEHP長期曝露のセルトリ細胞培養系で観察された。

In addition, the sperm cells from the reproductive stem cells were transferred to the sperm cells after transplantation. Three months after transplantation, detailed analysis of tissue samples, histology, and immunohistochemistry was performed. The results of this study confirmed the progress of sperm production in the reproductive stem cell transplantation and fine tube fragment transplantation, and the possibility of toxic effect test of the drug used in this system. The effects of Mono(2-ethylhexyl)phthalate(MEHP) on optical microscopy and transmission electron microscopy were investigated. The results showed that MEHP sperm weight was intentionally decreased and TUNEL positive cells were intentionally increased. High concentrations of MEHP were administered to sperm cells. Cytoplasmic vacuolation of sperm cells and shedding of sperm cells were identified. MEHP has a lower sensitivity than MEHP. In addition, MEHP was used to analyze the abnormality of cell culture in primary culture system and sperm organ culture system. If MEHP is added to the cell culture system and the sperm organ culture system, the material will be collected. MEHP added to the cell culture system, the number of empty cells in the cytoplasm of the cells increased significantly. The results of immunostaining, cell culture and sperm organ culture confirmed the time and concentration-dependent decrease of MEHP. In addition, the study of cell culture lines with MEHP long-term exposure was carried out.

项目成果

An ultrastructural study on the effects of mono(2-ethylhexyl) phthalate on mice testes : Cell death and sloughing of spermatogenic cells.

邻苯二甲酸单（2-乙基己基）酯对小鼠睾丸影响的超微结构研究：生精细胞的细胞死亡和脱落。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Okajimas Folia Anatomica Japonica 83・4
• 作者: Tay;T.W.;Andriana;B.B.;Ishii;M.;Choi;E.K.;Zhu;X.B.;Alam;M.S.;Tsunekawa;N.;Kanai;Y.;Kurohmaru;M.
• 通讯作者: M.

Potency of testicular somatic environment to support spermatogenesis in XX/Sry transgenic male mice

• DOI: 10.1242/dev.02751
• 发表时间: 2007-02-01
• 期刊: DEVELOPMENT
• 影响因子: 4.6
• 作者: Ishii, Mayuko;Tachiwana, Tsuyoshi;Kanai, Yoshiakira
• 通讯作者: Kanai, Yoshiakira