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サル胚性幹細胞の肝細胞への分化と胎児薬物動態予測モデルの構築

猴胚胎干细胞向肝细胞的分化及胎儿药动学预测模型的构建

基本信息

批准号：
17659044
负责人：
大森栄
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

サル胚性幹細胞(ES細胞)より作製した胚様体(EB)をコラーゲンI(CI)処理した培養皿にて接着培養した。培養後10日目に肝細胞マーカーであるα-フェトプロテイン(AFP)、15日目にアルブミン(ALB)およびCYP7A1遺伝子の発現が認められたことにより肝細胞へ分化していることが示唆された。さらに、薬物代謝型シトクロムP450(CYP)分子種であるCYP1A1の発現は、EB培養5日目から、CYA3A66は10日目から、CYP2C20、CYP2D17やCYP3A8の遺伝子も15日目からすでに発現していることが明らかとなった。また、この系に核内転写因子であるHNF-3βを導入することにより、肝細胞マーカーならびに薬物代謝型CYP分子種のmRNAの発現が増加した。以上の結果より、サルES細胞の肝細胞への分化系を確立すると共に、HNF-3βの導入はサルES細胞の肝細胞への分化を促進することが示唆された。次に、マトリックスの分化に及ぼす影響について検討した。EBの培養マトリックスとしてマトリゲル(MG)を用いた場合、肝マーカー遺伝子の発現はCI及びマトリゲルレデュースド(MR)と比較して顕著に高かった。また、CYP1A1とCYP2C43の発現レベルもMGを用いた場合、他のマトリックスと比較して顕著に高い発現が認められた。しかし、CYP2D17及びCYP3A8はマトリックス問で殆ど差が認められず、mRNA発現に対するマトリックスの影響が分子種間で異なることが明らかとなった。また、CYP1A1のmRNA発現は3-メチルコラントレイン処理により、CYP3A8はリファンピシン及びフェノバルビタール処理により顕著に誘導されたが、CYP2C43とCYP2D17はいずれの誘導剤処理においても殆ど変動しなかった。以上の結果より、MGでの培養はES細胞の肝細胞への分化を促進することが明らかとなった。また、誘導剤のCYP分子種に対する影響が対応するヒトの分子種と同様であったことから、サルES細胞由来肝細胞がヒトの薬物動態研究の有用なモデルとなることが示唆された。

Embryonic stem cells (ES cells) were cultured in culture medium. After 10 days of culture, the development of hepatocyte α-protein (AFP) and CYP7A1 protein was observed. CYP1A1, CYP3A66, CYP2C20, CYP2D17, CYP3A8 and CYP1A1 were detected on day 5 of EB culture. The expression of mRNA for HNF-3β, a nuclear transcription factor, increased in hepatocytes. These results indicate that HNF-3β can promote the differentiation of ES cells into hepatocytes. Second, the differentiation of the species and the influence of the species. EB's culture and development of MG (MG) are relatively high. CYP1A1 and CYP2C43 were found to be highly reactive in the presence of MG. CYP2D17 and CYP3A8 have been found to be responsible for molecular species diversity. CYP1A1 mRNA expression was induced by 3-mer protein treatment, CYP3A8 mRNA expression was induced by 3-mer protein treatment, CYP2C43 mRNA expression was induced by CYP2D17 mRNA treatment. The above results show that MG culture promotes the differentiation of ES cells into hepatocytes. The effect of CYP on the growth of human liver cells was studied.

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Determination of p-glycoprotein ATPase activity using luciferase.

DOI：
10.1248/bpb.29.560
发表时间：
2006-03
期刊：
Biological & pharmaceutical bulletin
影响因子：
2
作者：
T. Matsunaga;E. Kose;S. Yasuda;H. Ise;Uichi Ikeda;S. Ohmori
通讯作者：
T. Matsunaga;E. Kose;S. Yasuda;H. Ise;Uichi Ikeda;S. Ohmori

Expressions of cytochrome P450 in differentiating mouse embryonic stem cells.

细胞色素P450在分化小鼠胚胎干细胞中的表达。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Drug Metab Rev 37
影响因子：
0
作者：
Matsunaga T;Kose E;Yasuda S;Ise H;Ikeda U;Ohmori S;松永民秀;Matsunaga T et al.;Maruyama M et al.;Ohmori S et al.;Matsunaga T et al.
通讯作者：
Matsunaga T et al.

Simple and highly sensitive method for determination of P-glycoprotein ATPase activity using Luciferase.

使用荧光素酶测定 P-糖蛋白 ATP 酶活性的简单且高度灵敏的方法。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Drug Metab Rev 37
影响因子：
0
作者：
Matsunaga T;Kose E;Yasuda S;Ise H;Ikeda U;Ohmori S;松永民秀;Matsunaga T et al.;Maruyama M et al.;Ohmori S et al.
通讯作者：
Ohmori S et al.

ヒト胎児肝細胞におけるCYP3A分子種の発現と誘導.

CYP3A 物种在人胎儿肝细胞中的表达和诱导。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
松医会報 83号
影响因子：
0
作者：
Matsunaga T;Kose E;Yasuda S;Ise H;Ikeda U;Ohmori S;松永民秀
通讯作者：
松永民秀

Induction mechanisms of CYP3As in human fetal hepatocytes by glucocorticoids.

糖皮质激素在人胎儿肝细胞中诱导 CYP3As 的机制。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Drug Metab Rev 37
影响因子：
0
作者：
Matsunaga T;Kose E;Yasuda S;Ise H;Ikeda U;Ohmori S;松永民秀;Matsunaga T et al.;Maruyama M et al.
通讯作者：
Maruyama M et al.