胚性幹細胞におけるHEXによる肝細胞への分化誘導と機能解析

HEX诱导胚胎干细胞向肝细胞分化及功能分析

• 批准号: 17790197
• 负责人: 久保 篤史
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790197/
• 关键词: 胚性幹細胞; ES細胞; HEX; 肝細胞; Hex

今回ES細胞において安定したHexの発現を行うために,Doxにより遺伝子発現を誘導しえるES細胞(Ainv18)(Kyba M. et al. Cell 109 29-37,2002)を用いる。このtet0の下流にHex cDNAを導入することで、Doxの添加でHexを過剰発現するES細胞(tet-Hex ES細胞)を作成した(Kubo Blood 105,4590-4597,2005).無血清培養条件下でアクチビンを2-6日まで添加することで内胚葉を誘導後に、Doxを添加してHexの過剰発現を誘導する。内胚葉誘導時期である6-10日にHexを過剰発現させるとアルブミン遣伝子が発現することが分かった。一方、持続的に22日まで発現させると、アルブミンの発現が低下することから一過的なHexの発現が重要と考えられた、また、成熟肝細胞のマーカーであるCpase, TAT, Cyp7alなどの発現も確認した。また、免疫染色施行してアルブミン陽性細胞を認めた。さらに我々は、これらの細胞上清を用いて、アルブミン、トランスフェリンを測定し、Hexを発現させた群でのみアルブミンやトランスフェリンの分泌を認めた。さらに、Hexを過剰発現した細胞とHexの過剰発現のない細胞の比較、ならびにHex+/+の細胞を14日間肝細胞条件で培養した群とHex-/-の細胞を14日間肝細胞条件で培養した群とをマイクロアレイで比較して、Hexの下流遺伝子を検索した。これらの解析により、albumin, transferrinなどの血清蛋白、apolipoproteinなどのような脂質、fibrinogenなどの凝固関連因子などがHexにより制御されていることが明らかにされた。

ES cells are stable and stable. Hex development is induced in ES cells (Ainv18)(Kyba M. Cell 109 29- 37, 2002). Hex cDNA was introduced downstream of tet0 and added to ES cells (tet-Hex ES cells)(Kubo Blood 105, 4590 - 4597, 2005). Under serum-free culture conditions, the endoblast induction was induced after 2-6 days of addition, and the exogenesis induction was induced after addition of Dox. The endoblast induction period is 6-10 days. The development of Hex is important for the development of mature hepatocytes, such as Cpase, TAT and Cyp7al. Immunostaining was performed to identify positive cells. In addition, the expression of Hex was detected in the supernatant of the cells, and the expression of Hex was detected in the supernatant of the cells. Hex+/+ cells were cultured under 14-day hepatocyte conditions and Hex-/-cells were cultured under 14-day hepatocyte conditions. The analysis of serum protein, albumin, transferrin, lipid, fibrinogen, coagulation related factors, Hex, control factors, etc.