細胞死抑制蛋白による内耳障害の新しい治療法(蛋白治療)の開発

利用细胞死亡抑制蛋白开发内耳疾病的新治疗方法（蛋白质疗法）

• 批准号: 17659527
• 负责人: 山岨 達也
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659527/
• 关键词: ゲノム; 薬剤反応性; 内耳; 蝸牛; 難聴; 有毛細胞; アミノ配糖体; 細胞死; アポトーシス; 蛋白治療

細胞死を防御する蛋白質を投与して、内耳障害の予防・治療に応用する蛋白治療を開発した。ミトコンドリアからのチトクロームcの放出を抑えるBcl-XLの三つの水素結合を除去したanti-apoptotic蛋白(FNK)を作成し、これにHIV/Tat蛋白のProtein Transduction Domain(PTD)をくっつけて細胞内に導入できるようにした(FNK-PTD)。まずこの蛋白にmycをtagとして付けたものをモルモットの腹腔内投与し、1-6時間後に断頭し、蝸牛を固定し、パラフィン切片を作成した。その後Myc抗体を用いた免疫染色により蝸牛での発現について検討した。その結果、投与1時間後からこの蛋白は蝸牛内に出現し、3時間後に発現量がピークとなり、6時間後には著明に減少することがわかった。発現部位は、主にコルチ器、ラセン神経節であった。つぎにFNK-PTDが蝸牛有毛細胞の細胞死を予防できるかどうか検討した。カナマイシン((1)200mg/kg、または(2)400mg/kg)およびエタクリン酸((1)40mg/kgまたは(2)50mg/kg)によりモルモットの蝸牛有毛細胞を広範に障害し、この前後にFNK-PTDまたは生食を投与した。1週間後ABRを測定し、断頭後蝸牛を固定し、surface preparationにより残存有毛細胞の数をカウントした。その結果FNK-PTD投与群では(1)および(2)のどちらの障害においても有意にABR閾値の上昇を抑制し、内外有毛細胞ともに有意に細胞死を抑制した。また(2)の条件で障害8時間後にcPARP陽性細胞を調べるとFNK-PTDにより有意に減少していた。この結果はFNK-PTDが蝸牛に発現して、耳毒性薬剤による有毛細胞の細胞死を抑制することを示している。

Cell death prevention protein injection, inner ear damage prevention and treatment, use protein therapy to start a trial. In this study, the Bcl-XL protein (FNK) was removed, and the HIV/Tat protein Protein Transduction Domain (PTD) was obtained. The intracellular concentration of the HIV/Tat protein was injected into the cell (FNK-PTD). Use myc

项目成果

A protein derived from the fusion of TAT peptide and FNK,a Bcl-X_L derivative,prevents cochlear hair cell death from aminoglycoside ototoxicity in vivo

TAT 肽和 FNK 融合蛋白（一种 Bcl-X_L 衍生物）可防止体内氨基糖苷类耳毒性导致的耳蜗毛细胞死亡

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Neuroscience Research 85
• 作者: Kashio;A.
• 通讯作者: A.

The anti-cell death FNK protein protects cells from death induced by freezing and thawing

抗细胞死亡 FNK 蛋白可保护细胞免受冷冻和解冻引起的死亡

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun. 330・3
• 作者: Suzuki Y;Nakashima-Kamimura N;Uematsu M;Yasukawa T;Sudo K
• 通讯作者: Sudo K

Zonal necrosis prevented by transduction of the artificial anti-death FNK protein.

通过转导人工抗死亡 FNK 蛋白可防止带状坏死。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Cell Death Differ. 12
• 作者: Asoh;S.
• 通讯作者: S.