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p27siRNAおよびAtoh1遺伝子導入による哺乳類内耳有毛細胞の再生誘導

通过导入 p27siRNA 和 Atoh1 基因诱导哺乳动物内耳毛细胞再生

基本信息

批准号：
19659434
负责人：
山岨達也
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659434/
关键词：
再生蝸牛有毛細胞遺伝子治療前庭支持細胞 RNAi BrdU

项目摘要

モルモットの蝸牛有毛細胞をエクタクリン酸(50mg/kg内頚静脈に静注)とカナマイシン(400mg/kg筋注)により傷害した。このモデルを用い、傷害4日後にp27siRNAとGFPをコードするアデノウイルスベクター(p27siRNA・GFPAdV)を蝸牛内に投与し、2ヶ月後の内耳における再生の有無を検討した。コントロールには反対側(非投与耳)およびコントロールベクター(random sense siRNA-GFP)投与耳を用いた。機能については聴性脳幹反応(ABR)によりしらべたところ、p27siRNA・GFPdV投与側でコントロール側に比べ平均20dbの閾値低下が見られた。Surface preparetionおよびその割面の観察によりBrdUとGFPの多重染色を行ったところ、ベクターの感染細胞(GFP陽性細胞)における細胞分裂の存在が見られた。しかし有毛細胞マーカー(myosin VIIa)の多重発現は観察できなかった(今後の検討課題)。微細形態については走査電子顕微鏡により感覚上皮表面の形態をコントロールと比べたところ、境界細胞や柱細胞の表面に未成熟な聴毛が見られ、またもともと有毛細胞存在したscar部位にも聴毛に似た構造が見られた。透過電子顕微鏡により聴毛様構造物の生じた部位の細胞の状態を割面で観察したが、支持細胞が分裂して新たな有毛細胞様細胞が生じたという明らかな証拠は得られなかった。前庭有毛細胞についてもゲンタシン溶解液(40mg/ml)を0.2ml中耳内に投与して傷害し、1週間後にp27siRNA・GFPAdVを外側半規管に投与した。その結果感覚上皮にGFPの発現は見られ、分裂能の亢進も確認できている。

Hairy cells of snails are damaged by acid (50mg/kg intravenous) and by acid (400mg/kg intramuscular). The p27siRNA and GFP gene expression was detected 4 days after injury and the presence or absence of regeneration in the inner ear 2 months after injury. The opposite side (non-projection and ear) of the mouse is the opposite side (random sense siRNA-GFP). The function of ABR is to reduce the threshold of p27siRNA and GFPdV by an average of 20db. The presence of cell division in infected cells (GFP-positive cells) was detected by multiple staining of BrdU and GFP. The multiple occurrence of myosin VIIa in hairy cells was investigated. Microscopic examination of the surface morphology of the sensory epithelium, the surface morphology of the columnar cells and the immature hair structure Through the electron microscope, the cell state of the hair structure is observed, and the supporting cells are divided into new hair cells. Vestibular hairy cells were treated with 0.2 ml of Vestibular Hair Cell Lysol (40mg/ml) and p27siRNA and GFP AdV were injected into the lateral semicircular canal after 1 week. The expression of GFP in the sensory epithelium was detected, and the hyperactivity of mitotic activity was confirmed.