蝸牛explantを用いた蝸牛有毛細胞死の機序の解明とその予防に関する研究

利用耳蜗外植体阐明耳蜗毛细胞死亡机制及其预防研究

基本信息

  • 批准号:
    11877291
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.15万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1999 至 2000
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

成熟モルモットを麻酔・消毒後、滅菌操作で断頭し、側頭骨を摘出、実態顕微鏡下に蝸牛と前庭に分け、CO2インキュベーターに入れて培養した。その後1日-7日間培養し、固定してsurface preparationおよび透過電顕にて観察した。蝸牛においては培養2-3日以内に有毛細胞は死滅し、支持細胞も変性した。ただし、1-2日目の透過電顕の所見ではscar formationが見られ、一部支持細胞表面に有毛のような構造が見られた。前庭では有毛細胞の変性は蝸牛より遅く7日間の培養でも正常に近く保たれた。蝸牛・前庭どちらにおいても神経線維の脱落が培養初期より認められた。はじめはfree radical scavenger等の投与により有毛細胞死の防御を予定していたが、すでに同様の実験での報告がなされたため、この実験系を用いて遺伝子導入が可能か検討した。LacZ遺伝子を組み込んだアデノウィルスベクターを投与し、その発現を見たところ、蝸牛ではmesothelial cell以外に血管条、ラセン神経節、Deiters cellやpillar cellなどの支持細胞、外有毛細胞にLacZ遺伝子の発現が見られた。前庭では有毛細胞および支持細胞にLacZ遺伝子の発現が見られた。今後は神経賦活因子や再生関連遺伝子を組み込んだベクターの投与を行なう予定である。
Mature snails are sterilized, decapitated, removed from the lateral skull, and cultured under microscope. After 1 - 7 days of cultivation, fixation, surface preparation and observation by electricity Within 2-3 days of culture, the hairy cells of snails die, and the supporting cells change. 1-2 days later, a scar formation was seen on the surface of a supporting cell. The vestibule has hair cell and sex snail. Snail·Vestibule Free radical scavenger and other agents are used to determine the defense of hairy cells. LacZ gene expression is observed in the blood vessels, nerve nodes, Deiters cells, pillar cells, and outer hairy cells of snails other than mesenchymal cells. Vestibule hair cells and supporting cells are found in the development of lacZ genes. In the future, the activation factor and the regeneration related gene are grouped together.

项目成果

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知道了