個体レベルの唾液腺機能解析の為のsiRNAと超音波を応用した遺伝子抑制法の開発

开发使用 siRNA 和超声分析个体水平唾液腺功能的基因抑制方法

• 批准号: 17659589
• 负责人: 川口 充
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Tokyo Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17659589/
• 关键词: siRNA; in vivo; 超音波導入法; 唾液腺; rat

本研究では、in vivoでの遺伝子抑制を個別の臓器で行う技術としてsiRNAと超音波導入法の唾液腺への適応技術を開発することを目指している。モデル動物としてオスのウイスター系ラット(7-9週齢)を用いて実験を行った。昨年度は、1)標的遺伝子の検討、対象としての最適な唾液腺の検討、2)蛍光標識siRNAによる導入効率の検討、3)GAPDHに対するsiRNAによる導入効率の検討を行なった。本年度は、4)超音波照射のパラメータの検討および、5)リポフェクション試薬によるラット唾液腺へのsiRNA導入との比較を行なった。結果;4)超音波照射のパラメータの検討。GAPDHに対するsiRNAを耳下腺導管への逆行性挿管から注入し、超音波強度、照射時間、導入試薬濃度などのパラメータを検討した。照射48時間後に腺体を摘出し、qRT-PCR及びウエスタンブロットによりGAPDH発現量の抑制を観察した。最適なパラメータとして、超音波強度:2,0W/cm^2、照射時間=2分Duty比:50%、併用するマイクロバブル濃度:20%であった。優位な抑制を得るには導入試薬濃度として、1耳下腺あたり16μgのsiRNAを要した。発現抑制はmRNAレベルでは、著明であったが蛋白レベルでは、明らかな抑制は観察できなかった。これは、GAPDHたんぱくの量とライフタイムによると思われた。5)リポフェクション試薬によるラット唾液腺へのsiRNA導入との比較。in vitroでのsiRNA導入に汎用されるリポフェクション法のラット唾液腺へのsiRNA導入効率を検討した。しかし、4)と同様量の16μgのsiRNAに対しin vitroで最適な量のリポフェクション試薬を耳下腺に注入し48時間後に摘出してmRNA量をqRT-PCRにより評価したが、有為な抑制は観られなかった。また、リポフェクション試薬の使用では、耳下腺周囲に著明な炎症反応が観察された。現在、in vivoに使用するリポフェクション試薬量の検討を行なっている。これらの実験結果の一部は、薬理学会総会(平成19年3月14-16日)で発表予定である。また現在、論文を作成中である。

This study で は, the in vivo で の heritage 伝 child restrain を individual の viscera で line う technology と し て siRNA と ultrasound method of import の salivary gland へ の optimum 応 technology を open 発 す る こ と を refers し て い る. モ デ ル animal と し て オ ス の ウ イ ス タ ー department ラ ッ ト (7 to 9 weeks 齢) を い て be 験 を line っ た. Annual は yesterday, 1) mark but 伝 の 検 please, like と seaborne し て の optimum な salivary gland の beg, 2) 蛍 light logo 検 siRNA に よ る import working rate の beg, 3) 検 GAPDH に す seaborne る siRNA に よ る import working rate の 検 line for を な っ た. は this year, 4) ultrasound irradiation の パ ラ メ ー タ の beg お 検 よ び, 5) リ ポ フ ェ ク シ ョ ン try 薬 に よ る ラ ッ ト salivary gland へ の siRNA import と の is line を な っ た. Result; 4) Ultrasound irradiation パラメ パラメ タ 検 検 discussion. GAPDH に す seaborne る siRNA を parotid duct へ の retrograde grip tube か ら injection し, ultrasound intensity, irradiation time, concentration of import try 薬 な ど の パ ラ メ ー タ を beg し 検 た. Irradiation time after 48 に glands を pick out し, qRT - PCR and び ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト に よ り GAPDH 発 amount is の inhibit を 観 examine し た. Optimum な パ ラ メ ー タ と し て, ultrasound intensity: 2, 0 W/cm ^ 2, irradiation time = 2 points Duty ratio: 50%, with す る マ イ ク ロ バ ブ ル concentration: 20% で あ っ た. The superior position な inhibits を, resulting in るに るに for the introduction of the drug concentration と <s:1> て, and 1 subear gland あた <s:1> 16μg of <s:1> siRNAを requires た. 発 now inhibit は mRNA レ ベ ル で は, zhao Ming で あ っ た が protein レ ベ ル で は, Ming ら か な inhibit は 観 examine で き な か っ た. Youdaoplaceholder2 れた んぱく, GAPDHたんぱく <s:1> quantity とラ フタ フタ ムによると ムによると think われた. 5)リポフェ ショ ショ ショ drug test によるラット salival gland へ <s:1> siRNA introduction と <s:1> comparison. The in vitro で の siRNA import に domestic さ れ る リ ポ フ ェ ク シ ョ ン method の ラ ッ ト salivary gland へ の siRNA into sharper rate を beg し 検 た. し か し, 4) with others と の 16 mu g の siRNA に し seaborne in vitro the optimal amount of な で の リ ポ フ ェ ク シ ョ ン try 薬 を parotid に injection し に after 48 time picking out し て amount of mRNA を qRT - PCR に よ り review 価 し た が, for な suppression は 観 ら れ な か っ た. Youdaoplaceholder0, リポフェ, ショ, <s:1> use of the test swab で, 囲に around the subear gland, な inflammation, 応が観 examination された. Now, in vivoに uses the するリポフェ するリポフェ ショ ショ するリポフェ dosage of the test drug 検 to seek を line なって る る. The results of the <s:1> experiment were announced by the first division of で and the 総 association of the Pharmaceutical Society (March 14-16, Heisei 19)で. Youdaoplaceholder3. Youdaoplaceholder0 Currently, the paper を is in the process of being completed である.

项目成果

Expression of the mRNA and protein of serine racemase in primary cultures of rat neurons.

大鼠神经元原代培养物中丝氨酸消旋酶 mRNA 和蛋白的表达。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Eur J Pharmacol. 548・1-3
• 作者: Yoshikawa M;Nakajima K;Takayasu N;Noda S;Sato Y;Kawaguchi M;Oka T;Kobayashi H;Hashimoto A
• 通讯作者: Hashimoto A

【唾液腺の機能と機能不全】唾液腺と糖尿病ストレス

[唾液腺的功能和障碍]唾液腺与糖尿病应激

• 发表时间: 2006
• 期刊: 日本薬理学雑誌 127・4
• 作者: 渡辺正人;川口充;石川康子
• 通讯作者: 石川康子

Ketamine enhances the expression of serine racemase and D-amino acid oxidase mRNAs in rat brain

• DOI: 10.1016/j.ejphar.2006.04.021
• 发表时间: 2006-07-01
• 期刊: EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACOLOGY
• 影响因子: 5
• 作者: Takeyama, Kazuhide;Yoshikawa, Masanobu;Hashimoto, Atsushi
• 通讯作者: Hashimoto, Atsushi

【楽の副作用】副作用の薬理 薬物治療と口腔内障害

[简单副作用]副作用药物治疗和口腔疾病的药理学

• 发表时间: 2006
• 期刊: 日本薬理学雑誌 127・6
• 作者: 川口充;澤木康平;大久保みぎわ;坂井隆之;四宮敬史;小菅康弘
• 通讯作者: 小菅康弘

化学療法薬からの癌細胞のサバイバルメカニズム.

化疗药物中癌细胞的生存机制。

• 发表时间: 2006
• 期刊: 日本薬理学雑誌 127・5
• 作者: Takeyama K;Yoshikawa M;Oka T;Kawaguchi M;Suzuki T;Hashimoto A;坂井隆之
• 通讯作者: 坂井隆之