アデノ随伴ウイルスの部位特異的組込み機構を用いたトランスジェニックマウスの作製

利用腺相关病毒位点特异性整合机制产生转基因小鼠

• 批准号: 18650113
• 负责人: 卜部 匡司
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18650113/
• 关键词: アデノ随伴ウイルス; Rep蛋白質; AAVS1領域; トランスジェニックマウス; 部位特異的組込み

アデノ随伴ウイルス(adeno-associated virus:AAV)はヒト第19番染色体の酷VS1領域(19q13.4)に特異的に組み込まれるが、この性質を利用し効率よく表現型が安定したトランスジェニックマウスを作製することが可能か、基礎的検討を行った。AAVの複製蛋白質RepはAAVゲノム両末端のinverted terminal repeat(ITR)と呼ばれる配列に結合するが、同様の配列がAAVS1領域に存在し、Rep蛋白質がITRとAAVS1領域の両者に結合しAAVゲノムのAAVS1への特異的組込みが起こる。前年度引き続きモデル実験を行った。Neo遺伝子をAAVゲノムのinverted terminal repeat(ITR)で挟んだプラスミドと、AAVの複製蛋白質であるRep68をCMVプロモーターで発現するプラスミドを10T1/2細胞、NIN3T3細胞、C2C12細胞にコトランスフェクションし、Neo遺伝子が組み込まれているか、Neo遺伝子とAAVS1領域に設定したプライマーでPCRを行い、その増幅産物量をコントロールと比較した。その結果、これら3つのマウス由来の細胞株においてAAVS1 orthologへのNeo遺伝子の特異的組込み効率は極めて低く、実用的ではないことが明らかとなった。効率が低い原因として、ヒトAAVS1とマウスAAVS1 orthologが完全に一致していないことが主な原因と考えられた。

Adeno-associated virus (AAV) is a unique group of genes in chromosome 19 and VS1 domain (19q13.4), and its properties are utilized to determine the phenotype stability and control potential. AAV replication protein Rep AAV must bind to inverted terminal repeat(ITR) and call sequences, and the same sequences exist in the AAVS1 domain. Rep proteins bind to ITR and AAVS1 domain, and specific groups of AAV must arise. The previous year, the company had launched a series of activities. The inverted terminal repeat(ITR) of Neo gene AAV must contain the gene expression, AAV replication protein Rep68, CMV expression, Neo gene expression, Neo gene expression, AAVS1 domain setting, and amplification product quantity. The result is that the cell line from which it originated has a specific composition rate of AAVS1 ortholog and Neo gene. AAVS1 ortholog is completely consistent with AAVS1 ortholog.

项目成果

Prevention of diabetic retinopathy by intraocular soluble flt-1 gene transfer in a spontaneously diabetic rat model.

• DOI: 10.3892/ijmm.19.1.75
• 发表时间: 2007
• 期刊: International journal of molecular medicine
• 影响因子: 5.4
• 作者: J. Ideno;H. Mizukami;A. Kakehashi;Yuka Saito;T. Okada;M. Urabe;A. Kume;M. Kuroki;M. Kawakami;S. Ishibashi;K. Ozawa

Removal of empty capsids from type 1 adeno-associated virus vector stocks by anion-exchange chromatography potentiates transgene expression

• DOI: 10.1016/j.ymthe.2005.11.024
• 发表时间: 2006-04-01
• 期刊: MOLECULAR THERAPY
• 影响因子: 12.4
• 作者: Urabe, M;Xin, KQ;Ozawa, K
• 通讯作者: Ozawa, K

Interleukin-10 expression mediated by an adeno-associated virus vector prevents monocrotaline-induced pulmonary arterial hvaertension in rats

腺相关病毒载体介导的白细胞介素10表达可预防野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压

• 发表时间: 2007
• 期刊: Circ. Res. 101
• 作者: Yokota T;Sasaguri H;Yamada H;Unno T;Yamamoto T;Kubodera T;Anzai M;Mitani T;Mizusawa H;横田隆徳;横田隆徳;横田隆徳;Yokota T;横田隆徳;Ito T.
• 通讯作者: Ito T.