アデノ随伴ウイルスの部位特異的組込み機構を用いたトランスジェニックマウスの作製

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アデノ随伴ウイルス(adeno-associated virus:AAV)はヒト第19番染色体の酷VS1領域(19q13.4)に特異的に組み込まれるが、この性質を利用し効率よく表現型が安定したトランスジェニックマウスを作製することが可能か、基礎的検討を行った。AAVの複製蛋白質RepはAAVゲノム両末端のinverted terminal repeat(ITR)と呼ばれる配列に結合するが、同様の配列がAAVS1領域に存在し、Rep蛋白質がITRとAAVS1領域の両者に結合しAAVゲノムのAAVS1への特異的組込みが起こる。前年度引き続きモデル実験を行った。Neo遺伝子をAAVゲノムのinverted terminal repeat(ITR)で挟んだプラスミドと、AAVの複製蛋白質であるRep68をCMVプロモーターで発現するプラスミドを10T1/2細胞、NIN3T3細胞、C2C12細胞にコトランスフェクションし、Neo遺伝子が組み込まれているか、Neo遺伝子とAAVS1領域に設定したプライマーでPCRを行い、その増幅産物量をコントロールと比較した。その結果、これら3つのマウス由来の細胞株においてAAVS1 orthologへのNeo遺伝子の特異的組込み効率は極めて低く、実用的ではないことが明らかとなった。効率が低い原因として、ヒトAAVS1とマウスAAVS1 orthologが完全に一致していないことが主な原因と考えられた。