初期化誘導ペプチドを用いた体細胞クローンマウスの作出

使用重编程诱导肽创建体细胞克隆小鼠

基本信息

  • 批准号:
    18650116
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.11万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Exploratory Research
  • 财政年份:
    2006
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2006 至 2007
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

研究代表者らは、未受精卵細胞質中に、核の初期化誘導に関わる蛋白質(リン酸化TCTP)を同定し、リン酸化TCTPペプチドを導入した体細胞を核移植に用いると、クローンウシが高率に得られる事を明らかにした。そこで、マウス核移植実験系を用いてリン酸化TCTPの持つ初期化誘導能を確認する事を目的に実施した。これまでは、接着細胞であるウシ培養細胞へ不活化センダイウイルスを用いる方法(GenomeOne)でペプチドを導入し、核移植に用いてきた。しかしながら、マウス体細胞の核移植で確実に産子の得られる細胞は、浮遊細胞である卵丘細胞や短期間培養する卵胞上皮細胞に限られている。これらの細胞へGenomeOneを用いてペプチド導入を行うと、細胞融合が高率に生じた事から、前年度はペプチドの効率的導入法を検討してきた。本年度は、これらの手法を用いて、リン酸化TCTPペプチドの導入がマウス体細胞核移植卵の発生能に及ぼす影響を検討した。卵胞上皮細胞ヘリン酸化ペプチドを導入し、除核未受精卵細胞質に直接注入法を用いて核移植した。ついで、トリコスタチンA (TSA)添加培地で前培養し、TSA添加活性化培地で6時間培養して活性化後、体外で4日間培養して胚盤胞へ発生させた。つぎに、胚盤胞を受胚雌に移植して胎子への発生率を調べた。なお、対照区として、非リン酸化ペプチド導入体細胞を用いた。その結果、胚盤胞への発生率は、実験区49% (176/358)、対照区57% (104/183)と有意差が見られなかった。また、妊娠10.5日目における生存胎子の割合も両区で大差は見られなかった。リン酸化ペプチド導入を導入した体細胞におけるOct4蛋白質の発現の有無を調べたが、検出する事は出来なかった。本実験いた事による可能性が考えられた。
Research representatives ら は, に in the unfertilized egg cytoplasm, nuclear early の induced に masato わ る protein (リ ン acidification TCTP) を with し, リ ン acidification TCTP ペ プ チ ド を import し た somatic nuclear transplantation に を with い る と, ク ロ ー ン ウ シ が に too high rate ら れ る matter を Ming ら か に し た. そ こ で, マ ウ ス nuclear transfer be を 験 department with い て リ ン acidification TCTP の hold つ early change can induce を confirm す を purpose に る things be applied し た. こ れ ま で は, then cell で あ る ウ シ culture cell へ inactive セ ン ダ イ ウ イ ル ス を with い る method (GenomeOne) で ペ プ チ ド を import に し, nuclear transplantation with い て き た. し か し な が ら, マ ウ ス somatic nuclear transplantation で の really be such に の have ら れ は る cells, phytoplankton cells で あ る eggs during high cell や short training す る follicle epithelial cells に limit ら れ て い る. こ れ ら の cells へ GenomeOne を with い て ペ プ チ ド import line を う と が high rate, cell fusion に raw じ た matter か ら, former annual は ペ プ チ ド の working rate of import を beg し 検 て き た. This year は, こ れ ら の gimmick を with い て, リ ン acidification TCTP ペ プ チ ド の import が マ ウ ス somatic cell nuclear transfer eggs の 発 raw に and ぼ す influence を beg し 検 た. Oocyte epithelial cells ヘリ are acidified ペプチドを and introduced into ペプチドを. The cytoplasm of unfertilized oocytes is removed from the nucleus に and directly injected into を. Nuclear transplantation is performed with <s:1> て and た. つ い で, ト リ コ ス タ チ ン A (TSA) to add the petty で culture し, TSA add activity before the petty で 6 time cultivating し て activeness, in vitro で after 4 day training し て blastoderm cell へ 発 raw さ せ た. The ぎに ぎに and blastocyst を are regulated by the を occurrence rate of <s:1> て fetus へ after the に transfer from the embryo to the female を. Youdaoplaceholder0, と て て of the irradiation area, non-リ <s:1> acidification ペプチド introduction of somatic cells を use なお た. そ の results and blastoderm cell へ の 発 は birth rate, be 験 area 49% (176/358) 57% (104/183), polices according to area と deliberately poor が see ら れ な か っ た. Youdaoplaceholder0, at 10.5 days of gestation における, the surviving fetus has a <s:1> conjunction and the <s:1> zone で major difference また as seen in られな られな った った. リ ン acidification ペ プ チ ド import を import し た somatic に お け る Oct4 protein の 発 の now whether を adjustable べ た が, 検 す は る things な か っ た. This experiment is based on the た event による possibility が examination えられた.

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
マウス体細胞核移植卵の発生能に及ぼすトリコスタチン(TSA)処置時間の影響
曲古抑菌素(TSA)处理时间对小鼠体细胞核移植卵发育潜力的影响
  • DOI:
  • 发表时间:
    2008
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    X.P.Li;Y.Kato;Y.Tsunoda;角田 幸雄
  • 通讯作者:
    角田 幸雄
Aging of recipient oocytes reduces the development of cloned embryos reoeiving cumulus cells
受体卵母细胞的老化会降低接收卵丘细胞的克隆胚胎的发育
Comparative gene expression analysis of bovine nuclear-transferred emblyos withdifferent developmental potential by cDNA micrarray and real-time PCR to determine genes that might reflect calf normality
通过cDNA微阵列和实时PCR对具有不同发育潜力的牛核移植胚胎进行比较基因表达分析,以确定可能反映小牛正常性的基因
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    X.P.Li;G.Liu;Y.Kato
  • 通讯作者:
    Y.Kato
Comparative studies on the mRNA expression of development-related genes in an individual mouse blastocysts with different developmental potential
不同发育潜能小鼠个体囊胚中发育相关基因mRNA表达的比较研究
  • DOI:
  • 发表时间:
    2006
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Shinohara T;et al.;X.P.Li
  • 通讯作者:
    X.P.Li
Gene expression in individual bovine somatic cell cloned embryos at the 8-cell and blastocyst stages of preimplantation development
  • DOI:
    10.1262/jrd.19096
  • 发表时间:
    2007-12-01
  • 期刊:
  • 影响因子:
    1.8
  • 作者:
    Amarnath, Dasari;Li, Xiangping;Tsunoda, Yukio
  • 通讯作者:
    Tsunoda, Yukio
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  • 通讯作者:
    波多野 道康.

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  • 资助金额:
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    1968
  • 资助金额:
    $ 2.11万
  • 项目类别:
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