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初期化誘導ペプチドを用いた体細胞クローンマウスの作出

使用重编程诱导肽创建体细胞克隆小鼠

基本信息

批准号：
18650116
负责人：
角田幸雄
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18650116/
关键词：
初期化初期化誘導ペプチド核移植マウス

项目摘要

研究代表者らは、未受精卵細胞質中に、核の初期化誘導に関わる蛋白質(リン酸化TCTP)を同定し、リン酸化TCTPペプチドを導入した体細胞を核移植に用いると、クローンウシが高率に得られる事を明らかにした。そこで、マウス核移植実験系を用いてリン酸化TCTPの持つ初期化誘導能を確認する事を目的に実施した。これまでは、接着細胞であるウシ培養細胞へ不活化センダイウイルスを用いる方法(GenomeOne)でペプチドを導入し、核移植に用いてきた。しかしながら、マウス体細胞の核移植で確実に産子の得られる細胞は、浮遊細胞である卵丘細胞や短期間培養する卵胞上皮細胞に限られている。これらの細胞へGenomeOneを用いてペプチド導入を行うと、細胞融合が高率に生じた事から、前年度はペプチドの効率的導入法を検討してきた。本年度は、これらの手法を用いて、リン酸化TCTPペプチドの導入がマウス体細胞核移植卵の発生能に及ぼす影響を検討した。卵胞上皮細胞ヘリン酸化ペプチドを導入し、除核未受精卵細胞質に直接注入法を用いて核移植した。ついで、トリコスタチンA (TSA)添加培地で前培養し、TSA添加活性化培地で6時間培養して活性化後、体外で4日間培養して胚盤胞へ発生させた。つぎに、胚盤胞を受胚雌に移植して胎子への発生率を調べた。なお、対照区として、非リン酸化ペプチド導入体細胞を用いた。その結果、胚盤胞への発生率は、実験区49% (176/358)、対照区57% (104/183)と有意差が見られなかった。また、妊娠10.5日目における生存胎子の割合も両区で大差は見られなかった。リン酸化ペプチド導入を導入した体細胞におけるOct4蛋白質の発現の有無を調べたが、検出する事は出来なかった。本実験いた事による可能性が考えられた。

The study representatives expressed the same level of protein (TCTP) in the cytoplasm of unfertilized eggs and nuclear initiation induction, and introduced TCTP into somatic cells for nuclear transfer. The aim of this study is to confirm the initial induction energy of TCTP by using the method of nuclear transplantation. GenomeOne is a method for introducing and transferring nuclear cells into a cell culture without activation. Somatic cell nuclear transfer can be carried out in vitro, and egg epithelial cells can be cultured in vitro for a short time. Since the introduction of these cells into GenomeOne has been carried out and the high rate of cell fusion has occurred, we will discuss the effective introduction methods of selection agents in the previous year. This year, the use of TCTP in the introduction of somatic cell nuclear transplantation and its impact on the development of human beings Oocyte epithelial cells were acidified by direct injection of cytoplasm from denucleated unfertilized eggs. In vitro culture, blastoderm cells develop after 6 days of culture and 4 days of culture with TSA. The rate of embryo development was regulated by embryo transfer and embryo transfer. In addition to the above, we can also introduce the cells into the cell culture system. The results showed that the rate of blastoderm cell formation was 49% (176/358) in the control area and 57% (104/183) in the contrast area. A large difference in the cleavage area of the surviving fetus was observed at 10.5 days of gestation. The expression of Oct4 protein in somatic cells is regulated and detected. This is the first time I've ever seen you.